阿托伐他汀對血管內皮細胞自噬作用的研究.pdf

1、第一部分:大鼠血管內皮細胞自噬模型的構建及電鏡鑒定 目的：為研究阿托伐他汀對血管內皮細胞自噬作用的影響，我們構建了大鼠血管內皮細胞自噬模型. 方法：貼塊法原代培養(yǎng)大鼠主動脈內皮細胞，經免疫細胞化學法(S—P法)鑒定。血管內皮細胞傳至第3代時，取對數(shù)生長期細胞，換用3％胎牛血清(FBS)的DMEM液培養(yǎng)12h使細胞同步化。所選細胞換用20％FBS的DMEM培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)細胞24h后，用PBS液洗滌3遍，加入與原培養(yǎng)基相

2、同體積的Hanks'液孵育30分鐘后收獲細胞。將得到的細胞制作成電鏡標本，觀察，攝片。 結果：1在倒置相差顯微鏡下觀察，正常細胞生長良好，呈扁平多角形，邊界清楚，胞質豐富，核圓形或橢圓形，居中，偶見雙核，隨細胞密度增加呈現(xiàn)“鋪路石樣”排列。 2熒光顯微鏡下可見細胞胞漿內均呈現(xiàn)綠色熒光，即胞漿內表達Ⅷ因子，符合內皮細胞特征。 3經透射電鏡觀測所構建的細胞自噬模型，發(fā)現(xiàn)各細胞中均出現(xiàn)包裹有未降解的胞漿物質、細胞器的雙

3、層膜結構，高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)其為典型的自噬體結構，自噬模型構建成功。 結論：本研究結果為進一步進行阿托伐他汀對血管內皮細胞自噬作用的研究奠定了基礎。 第二部分阿托伐他汀對血管內皮細胞自噬作用的影響 目的：觀察不同時相使用阿托伐他汀對血管內皮細胞自噬的影響，探討其保護血管內皮細胞的可能機制。 方法：采用Hanks’液替代培養(yǎng)基以饑餓誘導的方法，使血管內皮細胞發(fā)生自噬。在誘導自噬前和誘導過程中，使細胞分別與含或

4、不含阿托伐他汀的正常培養(yǎng)基或Hanks'液共孵育，并隨機分為空白對照組(Ⅰ組)、誘導前和誘導中都應用阿托伐他汀組(Ⅱ組)、僅在誘導中應用阿托伐他汀組(Ⅲ組)和僅在誘導前應用阿托伐他汀組(Ⅳ組)。應用透射電鏡檢測各組細胞自噬的發(fā)生情況，RT—PCR技術檢測組間Beclin1和Mapllc3兩基因的表達。 結果：與Ⅰ組相比，Ⅱ組和Ⅲ組的Beclin1和Mapllc3兩基因mRNA表達均明顯降低(P＜0.01)。Ⅳ組的表達低于Ⅰ組，無