阿托伐他汀對靜脈橋的保護作用及機制初探.pdf

1、目的:冠狀動脈旁路移植術(coronary artery bypass graft，CABG)作為一種穩(wěn)定而有效的血管重建方法[1]被廣泛地應用于治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，但其遠期療效不甚理想。血管內膜增生是導致血管重建術后自體靜脈橋管腔狹窄或閉塞的主要原因，已被大量的研究所證實。引起靜脈移植再狹窄的主要原因是血管內皮損傷，其主要是由于血管內膜增生，血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle，VSMCs)過度增殖及

2、分泌大量細胞外基質。即再狹窄是一種由于手術的物理性損傷導致的缺血再灌注損傷后的局部血管修復反應，是血管重塑的過程。因此，阻斷血管平滑肌的過度增殖是預防CABG術后靜脈橋再狹窄的有效策略。
　　大量的研究證實，阿托伐他汀能夠抑制血管平滑肌的增殖，據此推測，阿托伐汀可能阻斷CABG術后發(fā)生靜脈橋再狹窄，但其發(fā)生機制至今尚未闡明。NF-κB是從B淋巴細胞核中檢測到的一種能與免疫球蛋κ輕鏈基因的增強子κB序列特異結合的核蛋白因子。非活化狀

3、態(tài)下NF-κB以與IκB聚合的三聚體形式或與前體蛋白聚合的二聚體形式存在于胞漿中，在多種細胞因子的作用下，通過多種信號途徑IκB發(fā)生磷酸化并與NF-κB解聚，NF-κB被激活，將信息由胞漿傳遞至胞核并啟動相關靶基因的轉錄，參與自由基損傷、細胞凋亡、免疫調節(jié)、炎癥反應等病理生理過程[2]。此外，還有一些研究發(fā)現，當血管內皮細胞損傷發(fā)生時，多種炎癥介質和細胞因子釋放，激活NF-κB，NF-κB二聚體被活化，NF-κB激活后上調平滑肌細胞及內

4、皮細胞等基因表達，引起血管內膜增生而誘導管腔狹窄。但CABG術后靜脈橋血管內皮細胞增殖是否通過NF-κB信號轉導途徑誘導再狹窄，尚有待闡明。為此，本實驗旨在觀察CABG術后靜脈橋血管內皮細胞增殖是否通過NF-κB信號轉導通路誘導再狹窄，探討阿托伐他汀是否通過NF-κB信號通路發(fā)揮對靜脈橋的保護作用。
　　方法:健康雄性新西蘭大白兔(3±0.5Kg)40只，建立自體靜脈移植動物模型。
　　1、阿托伐他汀鈣對靜脈橋血管壁內膜厚度

5、、平滑肌細胞數及超微結構的影響。
　　具體分組如下:①假手術組(sham)組(n=10):僅分離左側頸外靜脈，不行血管移植，假手術1d起，經胃管灌注生理鹽水;②移植對照組（control）組(n=10):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注生理鹽水;③阿托伐他汀鈣(atorvastatin)5mg組(n=10):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注阿托伐他汀，劑量為5mg/kg.d;④阿托伐他汀鈣(atorvastatin)10mg組(n=1

6、0):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注阿托伐他汀，劑量為10mg/kg.d。
　　每組共處理4w，在靜脈移植后或假手術后4w取靜脈橋，分別用HE染色法、免疫組化、電鏡觀察阿托伐他汀對靜脈橋血管壁內膜厚度、平滑肌細胞數及超微結構的影響。
　　2、阿托伐他汀鈣對NF-κB蛋白及NF-κB p50/p65二聚體復合物表達的影響。
　　具體分組如下:①假手術組(sham)組(n=10):僅分離左側頸外靜脈，不行血管移植，假手術1

7、d起，經胃管灌注生理鹽水;②移植對照組（control）組(n=10):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注生理鹽水;③阿托伐他汀鈣(atorvastatin)5mg組(n=10):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注阿托伐他汀，劑量為5mg/kg.d;④阿托伐他汀鈣(atorvastatin)10mg組(n=10):靜脈移植術后1d起，經胃管灌注阿托伐他汀，劑量為10mg/kg.d。
　　每組共處理4w，在靜脈移植術后或假手術后4w取靜脈橋

8、，應用Western blot方法觀察NF-κB蛋白表達的變化，免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）方法觀察NF-κB p50/p65二聚體復合物表達的變化。探討阿托伐他汀對NF-κB表達的影響。
　　結果:
　　1、阿托伐他汀鈣對靜脈橋血管壁內膜厚度的影響
　　采用HE染色方法，在光鏡下觀察靜脈橋移植術后，靜脈橋血管壁內膜厚度的變化。
　　Control組(Fig.2)、atoravast

9、atin5mg組(Fig.3)、atoravastatin10mg組(Fig.4)靜脈橋血管管壁與sham組(Fig.1)相比，均有不同程度的增厚(P＜0.05)。與Sham組(Fig.1)相比，Control組(Fig.2)靜脈橋血管壁明顯增厚(P＜0.01)。與Control組(Fig.2)相比，atoravastatin5 mg組(Fig.3)無顯著性差異(P＞0.05);atoravastatin10mg組(Fig.4)靜脈橋血

10、管管壁平滑，內膜增生程度明顯減少(P＜0.05)。
　　2、阿托伐他汀鈣對靜脈橋血管壁內膜平滑肌數目的影響
　　采用免疫組化方法，在光鏡下觀察靜脈橋移植術后，靜脈橋血管壁內膜平滑肌細胞數目的變化。
　　Control組(Fig.6)、atoravastatin5 mg組(Fig.7)、atoravastatin10 mg組(Fig.8)靜脈橋血管內皮及平滑肌層與sham組(Fig.5)相比，均有不同程度的增殖(P＜0.

11、05)。與Sham組(Fig.5)相比，Control組(Fig.6)有大量增殖細胞深染(P＜0.01);atoravastatin5 mg組(Fig.7)深染的增殖細胞雖較Control組有所減少，但無明顯變化(P＞0.05);atoravastatin10 mg組(Fig.8)深染的增殖細胞明顯減少(P＜0.05)。
　　3、阿托伐他汀鈣對靜脈橋血管壁超微結構的影響
　　在電鏡下觀察靜脈橋移植術后，靜脈橋血管壁超微結構的

12、變化。
　　Control組(Fig.9)可見靜脈橋血管壁內膜明顯增厚。與Control組(Fig.9)相比，atoravastatin5 mg組(Fig.10)，靜脈橋血管壁內膜有一定程度的增厚，雖較Control組(Fig.9)少，但無顯著差異（P＞0.05）;atoravastatin10 mg組(Fig.11)內膜連續(xù)性好(P＜0.05)。
　　4、阿托伐他汀鈣對NF-κB蛋白表達的影響
　　應用Western

13、 blot方法觀察靜脈橋移植術后，阿托伐他汀鈣對NF-κB蛋白表達的影響
　　NF-κB p50（Fig.12）在Sham組、control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg均有一定的表達量。Sham表達量較少。與Sham組相比，control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg組其蛋白表達均有所上調(P＜0.05)。與control組相比，at

14、oravastatin5 mg組其蛋白表達雖有所下調，但無顯著性差異(P＞0.05)，atoravastatin10 mg組此蛋白表達明顯下調(P＜0.05)。
　　上述結果表明，阿托伐他汀鈣能夠顯著下調NF-κB p50的表達。
　　5、阿托伐他汀鈣對NF-κB p50/p65二聚體復合物表達的影響
　　通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)的方法研究了靜脈橋移植術后，阿托伐他汀鈣對NF-κB

15、 p50/p65二聚體復合物表達的影響。
　　NF-κB p50/p65二聚體復合物(Fig.12)在Sham組、control組、atoravastatin5 mg組、atoravastatin10 mg組均有表達，其中control組此二聚體復合物表達最多。與Sham組相比，control組其表達顯著上調(P＜0.01);atoravastatin5 mg組此二聚體復合物表達雖有所下調，但明顯高于Sham組(P＜0.05)。與

16、control組相比，atoravastatin10 mg組其表達明顯下調，差異有顯著性(P＜0.01)。
　　上述結果表明，阿托伐他汀鈣能夠有效阻斷靜脈橋移植術后NF-κBp50/p65二聚體復合物數量的上調。
　　小結:
　　1、靜脈橋移植術后，NF-κB的蛋白表達顯著上調;NF-κB被激活，即表現為NF-κB發(fā)生二聚體化，NF-κB二聚體復合物明顯上調，并由胞漿轉移至胞核。
　　2、靜脈橋移植術后，經10