組織工程髓核移植治療椎間盤(pán)退變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：證實(shí)種兔子細(xì)胞BMSCs與NPs 體外立體共培養(yǎng)可誘導(dǎo)分化成類(lèi)髓核細(xì)胞，表達(dá)髓核細(xì)胞生物學(xué)特性，體外與組織工程細(xì)胞支架材料體外構(gòu)建組織工程髓核體內(nèi)移植能夠抑制椎間盤(pán)退變并修復(fù)椎間盤(pán)缺損，為退變性椎間盤(pán)疾病的治療開(kāi)辟一條新的有效途徑。
　　 方法：體外分離、培養(yǎng)及獲取髓核細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并鑒定及檢測(cè)其生物活性檢測(cè)；通過(guò)膠原包被的transwell 建立NPs與BMSCs 立體共培養(yǎng)體系，顯微鏡下觀(guān)察其生物形態(tài)，并通過(guò)

2、免疫組化鑒定誘導(dǎo)后的BMSCs及RT-PCR 檢測(cè)其RNA表達(dá)量；接種誘導(dǎo)后的BMSCs 接種海藻鹽凝膠復(fù)合體體外建立組織工程髓核，倒置顯微鏡、掃描電鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察，觀(guān)察CM-Dil 熒光示蹤誘導(dǎo)后的BMSCs種子細(xì)胞增殖情況，通過(guò)細(xì)胞增殖檢測(cè)及RT-PCR 方法檢測(cè)種子細(xì)胞與海藻鹽凝膠的組織相容性；經(jīng)后路兔椎間盤(pán)髓核針刺建立椎間盤(pán)退變模型，建立椎間盤(pán)退變模型；體內(nèi)移植組織工程髓核，觀(guān)察CM-Dil 示蹤種子細(xì)胞移植后體內(nèi)增殖情

3、況，HE 染色及免疫熒光檢測(cè)移植后組織工程髓核的生物特性，運(yùn)用MRI觀(guān)察移植后組織工程髓核對(duì)抑制兔椎間盤(pán)退變并重建椎間盤(pán)的情況，westernblot 檢測(cè)組織工程髓核體內(nèi)移植后表達(dá)特異蛋白的情況。
　　 結(jié)果：體外分離、培養(yǎng)及鑒定BMSCs與NPs，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)證明BMSCs作為種子細(xì)胞的優(yōu)越性；transwell 立體共培養(yǎng)體系下，種子細(xì)胞BMSCs與NPs 共培養(yǎng)下，分化成類(lèi)髓核細(xì)胞，表達(dá)髓核細(xì)胞的生物特性；種子細(xì)胞誘導(dǎo)后