類髓核細(xì)胞復(fù)合藻酸鹽支架治療椎間盤退變的可行性研究.pdf

1、【目的】
　　1.證實(shí)用纖維環(huán)穿刺法誘導(dǎo)椎間盤退變建立動(dòng)物模型的可行性;
　　2.觀察類髓核細(xì)胞移植對(duì)退變椎間盤II型膠原、蛋白聚糖及IL-1和MMP-3的影響。
　　【方法】
　　(1)采用貼壁法培養(yǎng)、擴(kuò)增兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)和髓核細(xì)胞,在Transwell共培養(yǎng)板中將兩種細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)BMSCs成類髓核細(xì)胞;細(xì)胞免疫組化鑒定。(2)選取18只新西蘭大白兔針刺法誘導(dǎo)L3/4、L4/5、L5/6椎間盤

2、退變,2周后行MRI檢查。(3)以各兔L3/4、L4/5、L5/6節(jié)段隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組A(注入復(fù)合有類髓核細(xì)胞的藻酸鹽支架)、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組B(注入單純?cè)逅猁}支架)和空白對(duì)照組C(不作任何處理)。(4)分組飼養(yǎng)觀察,4、8、12周取出標(biāo)本,用免疫組化檢測(cè)各組標(biāo)本中蛋白聚糖和II型膠原的表達(dá)并用proplus軟件進(jìn)行圖片分析,觀察不同時(shí)間點(diǎn)兩者的變化,統(tǒng)計(jì)分析各組有無差異;westernblot法測(cè)定MMP-3、IL-1的變化,所得數(shù)據(jù)經(jīng)sps

3、s11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　【結(jié)果】
　　2周后MRI證實(shí)針刺法誘導(dǎo)后的18只兔椎間盤全部發(fā)生退變。共培養(yǎng)第三代BMSCs其聚集蛋白聚糖(aggrecan)及II型膠原表達(dá)免疫組化呈強(qiáng)陽(yáng)性。手術(shù)4、8、12周后實(shí)驗(yàn)組蛋白聚糖及II型膠原含量明顯高于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及空白空白組(P<0.05),westernblot顯示在實(shí)驗(yàn)組MMP-3、IL-1含量隨著植入時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低,且較對(duì)照組、空白組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意