趕山鞭抑制血管生成的有效成分及初步毒理研究.pdf

1、本文分為三個(gè)部分，第一部分為趕山鞭（Hypericumattenuatum）的化學(xué)成分研究。第二部分為趕山鞭抑制血管生成的有效成分研究。第三部分為趕山鞭有效成分的初步毒理研究。
　　 方法：
　　 ①利用現(xiàn)代色譜技術(shù)對(duì)趕山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物進(jìn)行分離，通過物理化學(xué)和光譜學(xué)方法鑒定結(jié)構(gòu)。②采用MTT實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)quercetin,rutin,hyperin，quercertin-3-O

2、-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside五種化合物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的抑制血管生成活性；化合物濃度梯度為0.1、1、5、10、50、100μg·mL-1;③采用斑馬魚胚胎毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，quercertin-3-O-β-D-glucoside五種

3、化合物對(duì)斑馬魚胚胎的毒性；化合物濃度梯度為1、2、4、8、16、32μg·μl-1。
　　 結(jié)果：
　　 ①從趕山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物中分離得到7個(gè)化合物，通過物理化學(xué)和光譜學(xué)方法鑒定結(jié)構(gòu)分別為：quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside,quer

4、certin-3’-O-β-D-glucoside.quercertin-4’-O-β-D-glucoside.
　　 ②HUVEC細(xì)胞的MTT檢測(cè)表明，在0.1、1、5、10、50、100μg·mL-1濃度梯度范圍內(nèi)，quercetin，rutin對(duì)HUVEC細(xì)胞均有生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。quercetin濃度＜1μg·mL-1時(shí)不顯著，≥1μg·mL-1時(shí)極顯著(p＜0.01);rutin在此濃度范圍內(nèi)均極顯著(p＜0.01)；hy

5、perin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside在濃度＜5μg·mL-1時(shí)對(duì)HUVEC細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，在濃度≤0.1μg·mL-1時(shí)對(duì)HUVEC細(xì)胞有極顯著生長(zhǎng)抑制效應(yīng)(p＜0.01)。在濃度＞5μg·mL-1時(shí)對(duì)HUVEC細(xì)胞有極顯著的生長(zhǎng)促進(jìn)效應(yīng)(p＜0.01)。
　　 quercertin-3-O-β-D-glucoside在濃度＜1μg·mL-1時(shí)，對(duì)HUVEC細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。

6、在濃度≤0.1μg·mL-1時(shí)，對(duì)HUVEC細(xì)胞有顯著生長(zhǎng)抑制效應(yīng)(p＜0.05)，在濃度＞5μg·mL-1時(shí)，對(duì)HUVEC細(xì)胞有生長(zhǎng)促進(jìn)效應(yīng)。在濃度＞10μg·mL-1，對(duì)HUVEC細(xì)胞有顯著的生長(zhǎng)促進(jìn)效應(yīng)(p＜0.05)．在濃度＞100μg·mL-1，對(duì)HUVEC細(xì)胞有極顯著的生長(zhǎng)促進(jìn)效應(yīng)(p＜0.01)．
　　 5種化合物均不呈劑量依賴效應(yīng)。
　　 ③斑馬魚胚胎毒性研究結(jié)果表明，72hpf,在1、2、4、8、16、

7、32μg·μl-1濃度梯度范圍內(nèi)，quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，quercertin-3-O-β-D-glucoside對(duì)斑馬魚胚胎致死致畸效應(yīng)明顯，隨著濃度遞增，死亡率、畸形率均升高，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)。72hpf,quercetin，rutin,hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，q

8、uercertin-3-O-β-D-glucoside顯著抑制孵化，隨著濃度遞增，抑制愈加明顯，呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)。
　　 結(jié)論：
　　 ①對(duì)藤黃科(Guttiferae)金絲桃屬植物趕山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物進(jìn)行分離，得到7個(gè)單體化合物，對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 ②quercetin，rutin有一定程度的抑制HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)的作用；hyperin，quercert

9、in-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside,quercertin-3’-O-β-D-glucoside，quercertin-4’-O-,β-D-glucoside有一定程度的抑制HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
　　 ③quercetin,rutin,hyperin,quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside