中藥糖足顆粒藥效學(xué)研究及安全性評(píng)價(jià).pdf

1、目的：通過中藥糖足顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒理和藥理作用的研究，結(jié)合中醫(yī)學(xué)及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)理論，系統(tǒng)、綜合評(píng)價(jià)該中藥復(fù)方制劑的藥效學(xué)作用機(jī)理及藥物的安全性，為其進(jìn)一步開發(fā)利用，進(jìn)入臨床提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為糖尿病高危足的治療提供安全依據(jù)。
　　方法：長期毒性實(shí)驗(yàn)：SD大鼠60只，雌雄對(duì)半，隨機(jī)分成三組，即糖足顆粒大劑量組、小劑量組及空白對(duì)照組，每組20只。其給藥量分別為5.10mg·kg-1，1.02mg·kg-1。每周稱重一次，按體重變化

2、予調(diào)整給藥劑量。每日定時(shí)給藥，連續(xù)13周。觀察給藥后大鼠的一般自主活動(dòng)（飲食、二便、活動(dòng)、死亡情況等）。最后一次給藥后12h，每組10只經(jīng)股動(dòng)脈取血，檢測血常規(guī)（W B C、N、R B C、HGB、PLT等）、血生化（電解質(zhì)、肝腎功等）指標(biāo)。斷頸法處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，解剖，肉眼觀察主要臟器（心、肝、脾等），計(jì)算其臟器系數(shù)。取上述臟器組織各一塊，F(xiàn)AA液固定行病理組織學(xué)檢查，將上述指標(biāo)進(jìn)行時(shí)間、組間比較。給藥13周結(jié)束后，每組10只動(dòng)物進(jìn)行2周

3、恢復(fù)期觀察，恢復(fù)期期間不給藥，每周稱量體重一次，14天后再次行上述指標(biāo)檢測，作統(tǒng)計(jì)分析以了解有無可逆的毒性反應(yīng)和可能出現(xiàn)的延遲、蓄積毒性。
　　糖尿病足動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)：70只SD雄性大鼠，隨機(jī)抽取60只，一次性快速腹腔注射STZ溶液40mg·kg-1。其后的一周內(nèi)，每天隨機(jī)檢測血糖，血糖水平值≥16.7mol·L-1者，視為成功建立糖尿病模型。造模后第二周通過游泳、冰塊降溫的方法造成遠(yuǎn)端肢體血液供應(yīng)障礙，建立糖尿病足模型。給予血糖＞

4、25mol·L-1的大鼠加用胰島素注射,約每天腹腔注射中效胰島素4單位。將成功入選的45只大鼠隨機(jī)分為糖足顆粒大劑量組（LA組）、中劑量組（ME組）及小劑量組（SL組），陽性對(duì)照組（MY組）、陽性空白組（MK組），與空白對(duì)照組（ZK組），每組各9只。糖足顆粒高、中、低劑量組每日給藥量為4.08mg·kg-1、2.04mg·kg-1、1.02mg·kg-1。陽性對(duì)照組予等量溫蒸餾水，陽性空白組及空白對(duì)照組不作任何處理。每日定時(shí)給藥，連續(xù)1

5、個(gè)月。每1～2天采用斷尾取血法檢測大鼠隨機(jī)血糖。同前按體重調(diào)整給藥劑量。觀察給藥后大鼠的一般自主活動(dòng)（飲食、二便、活動(dòng)、死亡情況等）。末次給藥后，腹腔注射10％水合氯醛(300mg·kg-1)麻醉處理，取敷藥部位約1.5×1.5cm皮膚制成標(biāo)本，HE染色觀察皮膚表皮厚度、成纖維細(xì)胞數(shù)、真皮附屬器（皮脂腺、毛囊、汗腺）數(shù)目，采用Mias3.0圖形分析系統(tǒng)對(duì)成纖維細(xì)胞核面積進(jìn)行半定量分析；Masson染色觀察真皮膠原纖維，對(duì)膠原纖維面積及積

6、分光密度進(jìn)行半定量分析；免疫組化觀察皮膚中表皮生長因子（EGF）及P物質(zhì)（SP）含量，對(duì)陽性物質(zhì)的面積及積分光密度進(jìn)行半定量分析。進(jìn)行組間差異性比較。
　　結(jié)果：長期毒性實(shí)驗(yàn)：一般自主活動(dòng)：實(shí)驗(yàn)各組之間相差不大；除給藥12周大劑量組體重變化出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）外，整個(gè)觀察期內(nèi)大鼠體重漸進(jìn)性增加，與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＞0.05）。給藥13周后大劑量組大鼠的血象（WBC、RBC、HGB、HCT等）各數(shù)值變化明顯

7、，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＜0.05），小劑量組及恢復(fù)期2周大鼠血象與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＞0.05）。整個(gè)觀察期間大鼠的血生化與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。肉眼觀察心臟、肝臟等主要臟器均未出現(xiàn)異常（無組織充血、水腫、壞死及變性），且各組大鼠臟器系數(shù)變化與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），組織病理切片結(jié)果未見異常。
　　糖尿病足動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)：一般自主活動(dòng)：實(shí)驗(yàn)各組之間相差不大。與ZK組比較，

8、模型各組的體重減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各組間兩兩比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。HE染色結(jié)果：與MK組、ZK組比較，LA組、ME組、SL組表皮厚度、成纖維細(xì)胞核面積及皮膚真皮附屬器（皮脂腺、毛囊、汗腺）數(shù)目明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），以SL組表皮厚度及成纖維細(xì)胞核面積、LA組真皮附屬器數(shù)目增加更明顯（P＜0.01）。MY組增加不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Masson染色陽性結(jié)果：膠原纖維

9、呈藍(lán)色。與MK組比較，LA組、ME組、SL組的藍(lán)色區(qū)域多，膠原纖維面積范圍增大，排列整齊緊密，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＜0.05），以LA組增加更明顯（P＜0.01），MY組增加不多，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)各組積分光密度均值依次增大，膠原纖維數(shù)量增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與MY組比較，給藥各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與ZK組比較，MK組膠原纖維面積及積分光密度增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。E

10、GF染色示：陽性物質(zhì)呈棕黃色、黃色、淺黃色，細(xì)絲狀、細(xì)顆粒狀，分布于真皮附屬器細(xì)胞內(nèi)及真皮纖維組織內(nèi)。與MK組、ZK組、MY組比較，實(shí)驗(yàn)各組EGF含量相差不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。SP染色示：陽性物質(zhì)呈棕黃色、黃色、淺黃色，細(xì)絲狀、細(xì)顆粒狀，分布于真皮附屬器細(xì)胞內(nèi)及真皮纖維組織內(nèi)。與ZK組比較，MK組、MY組陽性物質(zhì)面積及積分光密度減少，其他各組相對(duì)增加，但呈遞減趨勢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與MY組比較，SL

11、組、ME組、LA組陽性物質(zhì)面積及積分光密度明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），給藥組間數(shù)值兩兩比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：糖足顆粒安全性實(shí)驗(yàn)：中藥糖足顆粒外用劑量為安全劑量，長期用藥并未出現(xiàn)毒性、延遲性毒性或蓄積性毒性反應(yīng)。
　　糖尿病足動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn):中藥糖足顆粒能加強(qiáng)皮膚的屏障作用，改善糖尿病模型大鼠皮膚中水分變化，調(diào)節(jié)皮膚體溫，潤澤、營養(yǎng)皮膚，可有效緩解糖尿病皮膚癥狀。其發(fā)生機(jī)制可能通過上調(diào)皮