基于液質(zhì)聯(lián)用與質(zhì)譜庫檢索技術(shù)的前期胡化學(xué)成分分析.pdf

1、前胡為傘形科前胡屬白花前胡（PeucedanumpraeruptorumDunn）的干燥根，為臨床常用中藥?！吨袊幍洹酚涊d前胡具有降氣化痰、散風(fēng)清熱等功效，可用于痰熱喘滿，咳痰黃稠，風(fēng)熱咳嗽痰多等癥。研究表明，香豆素為前胡的主要化學(xué)成分，但由于前胡中成分復(fù)雜且部分成分含量較低，目前為止，對前胡中香豆素成分的研究僅限于少數(shù)幾種成分。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）具有快速準(zhǔn)確、靈敏、專屬等優(yōu)點(diǎn)，是復(fù)雜基質(zhì)中化學(xué)成分定量和定性

2、分析的有力工具。本研究即采用HPLC-MS技術(shù)對前胡中的香豆素成分進(jìn)行分析。在總結(jié)3'，4'-二酰氧基取代開洛酮類香豆素化合物電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律的基礎(chǔ)上，采用HPLC-MS技術(shù)對前胡中該類香豆素成分進(jìn)行定性分析;建立香豆素質(zhì)譜圖庫，通過質(zhì)譜庫檢索結(jié)合HPLC-MS的方法對前胡樣品進(jìn)行多種香豆素的含量測定，并應(yīng)用于市售藥材和混淆品的比較。
　　 第一部分液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定前胡中的主要香豆素成分
　　 目的:總結(jié)前胡主要香豆素

3、成分的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律，建立靈敏、有效的用于鑒定前胡中該類香豆素成分的HPLC-MS分析方法。
　　 方法:通過電噴霧離子源正離子一級質(zhì)譜掃描、母離子掃描和子離子掃描，研究3個3'，4'-二酰氧基取代開洛酮類香豆素成分對照品的質(zhì)譜裂解途徑，并總結(jié)其規(guī)律，進(jìn)而聯(lián)合采用母離子掃描-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描（PREC-IDA-EPI）和多離子監(jiān)測-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描(MIM-IDA-EPI)兩種模式鑒定前胡中該類香豆素化合

4、物。根據(jù)母離子掃描圖中同時出現(xiàn)的[M+NH4]+和[M+Na]+加合離子判斷未知香豆素的分子量，根據(jù)兩種模式產(chǎn)生的碎片離子信息推測化合物的結(jié)構(gòu)。采用C18柱進(jìn)行色譜分離，流動相體系為甲醇-1mmol/LNH4Ac，梯度洗脫。
　　 結(jié)果:總結(jié)了5項(xiàng)3'，4'-二酰氧基取代開洛酮類香豆素的裂解規(guī)律。①4'-C和3'-C上的兩個酰氧基發(fā)生烷氧α裂解為開洛酮類吡喃香豆素的主要裂解途徑;②m/z227為該類香豆素的特征碎片，可用以推斷開

5、洛酮類香豆素母核的存在;③此類化合物中成酯的酰氧基常見的有:乙酰氧基、異丁酰氧基、當(dāng)歸酰氧基、惕各酰氧基、2-甲基丁酰氧基、異戊酰氧基、千里光酰氧基等，而4'-C位上的烷氧鍵極易斷裂，形成基峰;因此，m/z287、m/z315、m/z327、m/z327、m/z329、m/z329和m/z327可分別用于鑒定3'-C位上上述酰氧取代基;④加合離子[M+NH]、[M+Na]+比準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+更穩(wěn)定，由此可判斷化合物的分子量;⑤與

6、簡單香豆素、呋喃香豆素不同，香豆素母核上α吡喃環(huán)連續(xù)丟失CO并非該類香豆素的主要裂解途徑。根據(jù)總結(jié)出的質(zhì)譜裂解規(guī)律共鑒定出前胡提取物中24個該類香豆素。
　　 結(jié)論:本法靈敏、有效，可成功用于前胡中主要香豆素類化合物的鑒定。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PREC-IDA-EPI和MIM-IDA-EPI掃描模式聯(lián)合使用能夠提供更為豐富可信的結(jié)構(gòu)信息，對控制藥材質(zhì)量具有重要意義。
　　 第二部分液質(zhì)聯(lián)用和庫檢索技術(shù)同時定性定量前胡及其混淆品中1

7、4種香豆素成分
　　 目的:建立14種香豆素的質(zhì)譜庫，并將質(zhì)譜庫檢索技術(shù)與HPLC-MS結(jié)合，建立一種專屬、準(zhǔn)確、可同時對14種香豆素進(jìn)行定性定量的HPLC-ESI-MS分析方法，并用于市售前胡藥材的質(zhì)量評價。
　　 方法:由MRM-IDA-EPI模式采集14種香豆素的質(zhì)譜圖，建立質(zhì)譜庫，結(jié)合庫檢索確證樣品中色譜峰，并采用MRM正離子掃描模式進(jìn)行定量分析。用所建立的方法對不同來源的35批前胡及市售藥材進(jìn)行分析。色譜條件:

8、色譜柱:AgilentExtend-C18色譜柱（250×4.6mm，5μm）;柱溫:25℃;流動相:乙腈(A)，0.1‰甲酸-0.2mmol/LNH4Ac緩沖溶液(B)，梯度洗脫，分析時間36min;流速:0.8mL/min;進(jìn)樣量10μL。質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子源;正離子監(jiān)測模式;離子噴霧電壓(ionsprayvoltage):5500V;簾氣:20psi;霧化氣(Gas1)60psi;加熱氣(Gas2):65psi;離子源溫

9、度(turbospraytemperature):650℃。定量模式采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，14種香豆素的監(jiān)測離子對分別為404.1/327.1（白前胡甲素）、444.1/327.1（白花前胡乙素）、446.1/327.1（白花前胡素E）、409.1/247.1（紫花前胡苷）、271.0/203.0（歐前胡素）、271.0/203.0（異歐前胡素）、163.0/107.0（傘形花內(nèi)酯）、217.0/202.0（佛手柑內(nèi)酯）、217.0

10、/202.0（花椒毒素）、187.0/131.0（補(bǔ)骨脂素）、187.0/131.0（異補(bǔ)骨脂素）、193.0/133.0（東莨菪內(nèi)酯）、247.0/231.0（茴芹內(nèi)酯）、247.0/217.0（異茴芹內(nèi)酯）?；衔镔|(zhì)譜采集采用多離子反應(yīng)監(jiān)測-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描(MRM-IDA-EPI)模式。EPI模式下，掃描范圍:50～500amu;固定填充時間:30ms;掃描速率:4，000amu/s;CES:35±15eV。
　　

11、 結(jié)果:建立的質(zhì)譜庫成功應(yīng)用于色譜峰的確證，14種香豆素在測定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢測限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度、儀器精密度和溶液穩(wěn)定性均符合要求。樣品測定結(jié)果表明，市售的“前胡”藥材中僅有3批為正品白花前胡，且白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量符合《藥典》規(guī)定，與藥材鑒定結(jié)果相符。白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E為白花前胡的主要成分，紫花前胡苷為紫花前胡的特征成分，其他藥材樣品在香豆素的種類和含量上與白花前胡差異甚大。