大黃炮制前后物質(zhì)基礎(chǔ)變化規(guī)律研究.pdf

1、中藥材必須經(jīng)過炮制加工成為飲片后才能應(yīng)用于臨床,這是中醫(yī)臨床用藥的一個特點。大黃是我國傳統(tǒng)常用中藥,其藥用歷史悠久,而且是通過多種炮制改變藥性使之廣泛應(yīng)用于臨床各科的典型范例。目前臨床常用的大黃飲片主要有生大黃、酒大黃、醋大黃、熟大黃(酒燉)和大黃炭。本論文作為國家自然基金重點項目“炮制改變大黃藥性的科學(xué)內(nèi)涵變化規(guī)律研究”的主要研究內(nèi)容,將緊緊圍繞炮制改變大黃藥性科學(xué)內(nèi)涵變化規(guī)律這一關(guān)鍵問題,以大黃炮制前后的物質(zhì)基礎(chǔ)變化為切入點,通過系

2、統(tǒng)的化學(xué)成分研究,結(jié)合主要化學(xué)成分炮制前后的定性、定量分析,探明大黃不同飲片的化學(xué)成分組成及量比關(guān)系,并以組分填充模擬炮制方法來揭示大黃飲片炮制前后物質(zhì)基礎(chǔ)的變化規(guī)律,為進(jìn)一步探討炮制與大黃藥性改變的相關(guān)性提供科學(xué)依據(jù)。
　　 本論文共分六章。
　　 第一章文獻(xiàn)綜述
　　 查閱了近10年來有關(guān)大黃的研究資料,從藥材基源、化學(xué)成分、質(zhì)量控制、古今炮制方法以及藥理作用等方面對大黃的研究現(xiàn)狀和存在問題進(jìn)行了分析和整理,

3、為本論文研究方案的制定和順利實施提供了有益的借鑒。
　　 第二章化學(xué)成分研究
　　 以掌葉大黃RheumpalmatumL.為研究對象,采用系統(tǒng)的化學(xué)提取分離方法,經(jīng)現(xiàn)代光譜和波譜分析鑒定,確定了34個化合物的結(jié)構(gòu)。分別為:反式-3,3’,5’-三羥基-4-甲氧基二苯乙烯-5'-O-β-D-葡萄糖苷[trans-3,3',5'-trihydroxy-4-methoxystilbene-5'-O-β-D-glucopyra

4、noside,DH-1],反式-3,3’,5’-三羥基-4-甲氧基二苯乙烯[trans-3,3',5'-trihydroxy-4-methoxystilbene,DH-2],沒食子酸乙酯[ethylgallate,DH-3],4’-羥基苯基-2-丁酮[4-(4'-hydroxyphenyl)-2-butanone,DH-4],大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷[physcion-8-O—β-D-glucopyranoside,DH-5

5、],大黃酚-8-O-β—D-葡萄糖苷[chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside,DH-6],沒食子酸[gallicacid,DH-7],兒茶素[catechin,DH-8],蘆薈大黃素-8-D-β-D-葡萄糖苷[aloe-emodin-8-O-β—D-glucopyranoside,DH-9],大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷[rhein-8-O-β—D-glucopyranoside,DH-10],番瀉

6、苷B[sennosideB,DH-11],4’-羥基苯基-2-丁酮-4’-O-β—D-(6”-O-桂皮酰基)-葡萄糖苷[4-(4’-hydroxyphenyl)-2-butanone-4’-O—β—D-(6”-O-cinnamoyl)-glucopyranoside,DH-12],番瀉苷A[sennosideA,DH-13],反式-3,5,4’-三羥基二苯乙烯-4’-O-β-D-(6"-O-沒食子?；?-葡萄糖苷[trans-3,5,4

7、’-trihydroxystilbene-4’-O—β—D-(6”-O—galloyl)-glucopyranoside,DH-14],4’-羥基苯基-2-丁酮-4'-O-β-D-(6”-O-(4”’-羥基)-桂皮?；?-葡萄糖苷[4-(4’-hydroxyphenyl)-2-butanone-4'-O-β—D-(6"-O-p—coumaroyl)-glucopyranoside,DH-15],大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷[emod

8、in-8-O-β-D-glucophyranoside,DH-16],4’-羥基苯基-2-丁酮-4’-O—β-D-(2”-O-沒食子?；?6”-O-(4”’-羥基)-桂皮酰基)-葡萄糖苷[4-(4’-hydroxyphenyl)-2-butanone-4’-O-β-D-(2"-O-galloyl-6”-O-p-coumaroyl)-glucopyranoside,DH-17],胡蘿卜苷[daucosterol,DH-18],β-谷甾醇[

9、β-sitosterol,DH-19],反式-3,5,4’-三羥基二苯乙烯-4’-O—β-D-葡萄糖苷[trans-3,5,4’-trihydroxystilbene-4’-O-β-D-glucopyranoside,DH-20],蘆薈大黃素-3-CH2-O—β—D-葡萄糖苷[aloe—emodin-3-CH2-O—β—D—glucophyranoside,DH-21],鄰二羥基苯[o-dihydroxy-benzene,DH-22],

10、4’-羥基苯基-2-丁酮-4’-O—β-D-(6”-O-沒食子?；?-葡萄糖苷[4-(4’-hydroxyphenyl)-2-butanone-4’-O-β—D-(6”-O-galloyl)-glucopy-ranoside,DH-23],大黃素-1-O-β-D-葡萄糖苷[emodin—1—O-β-D—glucophyranoside,DH-24],大黃酚[chrysophanol,DH-25],大黃素甲醚[physcion,DH-26

11、],大黃酸[rhein,DH-27],大黃素[emodin,DH-28],1-甲基-2-羧基-8-羥基-9,10-蒽醌-3-O-β-D-(6’-O-肉桂?；?葡萄糖苷[1-methyl-2-carboxyl-8-hydroxyl-9,10-anthraquinone-3-O-β-D-(6’-O—cinnamoyl)glucopyranoside,DH-29],2,5-二甲基-6,8-二羥基色原酮[2,5-dimethyl-6,8-dih

12、ydroxy—chromone,DH-30],大黃酸-8-O-β-D-(6’-O-丙二酸甲酯?；?吡喃葡萄糖苷[rhein-8-O-β-D-(6’-O—methoxylmalonyl)-glucopyranoside,DH-31],蘆薈大黃素[aloeemodin,DH-32],ω-羥基大黃素[citreorosein,DH-33],1-甲基-2,8-二羥基-3-羧基-9,10-蒽醌[1-methyl-2,8-dihydroxy-3-c

13、arboxy-9,10-anthraquinone,DH-34]。經(jīng)國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫檢索,確定化合物DH-29、DH-30、DH-31和DH-34為4個新化合物。此研究結(jié)果不僅豐富了大黃的化學(xué)成分研究內(nèi)容,而且也為大黃不同飲片的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了必要的前提條件。
　　 第三章大黃炮制前后物質(zhì)基礎(chǔ)的比較研究
　　 首次建立了以兩種波長進(jìn)行生大黃、酒大黃、醋大黃、熟大黃和大黃炭等5種飲片HPLC指紋圖譜測定的方法,通過不同飲片各

14、10批次的分析,形成了大黃5種飲片的對照指紋圖譜,并以化學(xué)成分研究中分離得到的化合物為對照,歸屬了生大黃、酒大黃、醋大黃指紋圖譜中的24個色譜峰；熟大黃圖譜歸屬了19個色譜峰；大黃炭圖譜歸屬了22個色譜峰。明確了大黃不同飲片的化學(xué)成分組成,為大黃不同飲片的定性鑒別提供了更為科學(xué)、全面的新方法。
　　 首次以非水解的方式,建立了大黃5種飲片中4個原生蒽醌苷及5個原生蒽醌苷元的含量測定方法,揭示了炮制前后蒽醌類成分的變化規(guī)律。同時還

15、首次建立了大黃飲片中二苯乙烯苷、苯丁酮及其苷、鞣質(zhì)類等12種主要化學(xué)成分的HPLC含量測定方法,初步揭示了大黃飲片炮制前后不同類型化學(xué)成分的變化規(guī)律,為完善大黃飲片質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 第四章大黃飲片模擬炮制研究
　　 論文首次建立了以“空白飲片”為載體的組分填充模擬炮制方法,與目前普遍采用的單成分加熱模擬炮制方法不同,本論文所采用的模擬炮制方法是以組分為研究對象,以“空白飲片”為載體,按照飲片原本的炮制方

16、法來進(jìn)行模擬飲片的炮制,其模擬炮制條件和炮制前后成分的變化更貼近于飲片的真實炮制變化情況。本論文成功地將該方法應(yīng)用于大黃飲片炮制前后化學(xué)成分變化規(guī)律的研究,通過三個組分各5種模擬飲片的比較研究,初步揭示了大黃飲片炮制前后主要化學(xué)成分的變化規(guī)律及可能的變化途徑。
　　 第五章藥理實驗結(jié)果
　　 本章主要介紹課題組在大黃飲片藥理實驗方面取得的結(jié)果。根據(jù)大黃飲片的功能主治,課題組以大黃“苦寒瀉下”功能藥性變化為主線,對生、酒、

17、熟、炭等4種大黃飲片進(jìn)行了瀉下作用及其機(jī)制的比較研究,結(jié)果顯示生大黃和酒大黃均具有明顯的瀉下作用,且生大黃作用強(qiáng)于酒大黃,熟大黃和大黃炭基本無瀉下作用。這不僅與大黃飲片的傳統(tǒng)功效特點相符合,而且結(jié)合物質(zhì)基礎(chǔ)研究所得到的結(jié)論,證實了基于傳統(tǒng)藥性理論的苦寒藥性與基于現(xiàn)代藥效學(xué)研究的瀉下作用強(qiáng)度均按同樣的順序逐步降低,大黃“苦寒瀉下”藥效物質(zhì)基礎(chǔ)——蒽醌苷類成分含量變化與飲片生物活性及藥性改變的相關(guān)性。此外,還證實了結(jié)合鞣質(zhì)及可水解鞣質(zhì)并非一

18、直以來認(rèn)為的具有收斂作用,而具有明顯的促進(jìn)胃腸運動及瀉下作用,而真正產(chǎn)生收斂作用的可能是縮合鞣質(zhì)和可水解鞣質(zhì)經(jīng)胃腸道消化分解產(chǎn)生的沒食子酸。這一結(jié)果為大黃作為瀉下藥物長期應(yīng)用會導(dǎo)致便秘提供了合理的解釋,對于臨床合理應(yīng)用大黃飲片具有重要的參考價值。
　　 第六章結(jié)論
　　 本論文在認(rèn)真分析和總結(jié)大黃近年來研究成果的基礎(chǔ)上,緊緊圍繞炮制改變大黃藥性科學(xué)內(nèi)涵變化規(guī)律這一關(guān)鍵問題,以大黃炮制前后的物質(zhì)基礎(chǔ)變化為切入點,以大黃“苦

19、寒沉降”功效為指征,從系統(tǒng)的化學(xué)成分研究入手,通過HPLC指紋圖譜定性和主要化學(xué)成分定量分析,明確了大黃5種飲片的化學(xué)成分組成及其量比關(guān)系,并將首創(chuàng)的“空白飲片”為載體的組分填充模擬炮制方法運用于大黃的研究,揭示了大黃飲片炮制前后化學(xué)成分的變化規(guī)律及其可能的變化途徑。結(jié)合課題組對大黃各炮制品瀉下作用及其機(jī)制探討的結(jié)果,證實基于傳統(tǒng)藥性理論的苦寒藥性是按照生大黃→酒大黃→熟大黃→大黃炭的順序逐步減弱,而基于現(xiàn)代藥效學(xué)研究的瀉下作用強(qiáng)度也按

20、同樣的順序逐步降低。
　　 論文緊密結(jié)合中藥炮制學(xué)科的研究重點和發(fā)展趨勢,以大黃為范例,探索建立了“以科學(xué)內(nèi)涵變化規(guī)律為紐帶分析炮制與藥性改變相關(guān)性”的炮制原理研究模式；建立了基于炮制原理的“多有效成分定量,指紋圖譜定性”的質(zhì)量評價模式；建立了“以模擬炮制方法揭示中藥炮制前后物質(zhì)基礎(chǔ)變化規(guī)律”的炮制原理研究模式,在豐富中藥飲片炮制原理研究方法的同時,為同類中藥的炮制研究提供了借鑒,拓寬了炮制學(xué)科的研究思路,提升了炮制學(xué)科的科研水