檳榔炒制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)與生物效應(yīng)變化規(guī)律研究.pdf

1、檳榔來源于棕櫚科植物檳榔 ArecacatechuL.的干燥成熟種子，具有殺蟲消積，行水，降氣，截瘧的功效，主要用于治療絳蟲病、蛔蟲病、姜片蟲病、蟲積腹痛、積滯瀉痢、里急后重、水腫腳氣、瘧疾等疾病。歷代本草記載，在使用本藥時，有生、熟之分，傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為：生檳榔力峻，長于治療蟲積、水腫、腳氣、瘧疾；炒檳榔可緩和藥性，以免克伐太過而耗傷正氣，適用于夾虛患者；焦檳榔長于消食導(dǎo)滯，用于治療食積不消、瀉痢后重；檳榔炒炭后具有消積止血作用，用于

2、治療血痢。中國藥典2010年版收載了炒檳榔和焦檳榔兩個炮制品，《中華藥?！肥蛰d了檳榔炭的制備方法。目前的已有研究探討了檳榔生品、炒黃樣品以及焦品的生物堿、鞣質(zhì)、氨基酸、微量元素的含量變化，但單從以上成分含量的變化無法反映出檳榔炮制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)的變化，并且未與生物效應(yīng)研究相結(jié)合，無法闡明檳榔炮制的原理。
　　目的
　　運(yùn)用在線式非接觸紅外測溫系統(tǒng)、自動炒藥機(jī)、色彩色差計等對檳榔的炒制過程進(jìn)行實(shí)時監(jiān)控，借鑒動力學(xué)思路及方法，結(jié)

3、合HPLC、MS、NMR等研究技術(shù)，探討檳榔炒制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)與生物效應(yīng)（藥效、毒性）的變化規(guī)律及其相互關(guān)聯(lián)性，為檳榔炒制工藝優(yōu)化及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)，闡明檳榔炒制原理，豐富中藥炮制的科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法
　　1、采用在線式非接觸紅外測溫系統(tǒng)、自動炒藥機(jī)、色彩色差計等對檳榔的炒制過程進(jìn)行實(shí)時監(jiān)控，為規(guī)范檳榔炒制工藝參數(shù)、保證炒制品的質(zhì)量均一提供可能。
　　2、采用HPLC法測定檳榔炒制過程中檳榔堿、檳榔次堿

4、、去甲基檳榔堿的含量，以及測定醚溶性生物堿和鞣質(zhì)的含量，探討檳榔在炒制過程中各化學(xué)成分的變化規(guī)律，為檳榔飲片及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。
　　3、采用HPLC法，建立檳榔生品至炭品的水溶性成分HPLC指紋圖譜，探討檳榔在炒制過程中指紋圖譜的變化規(guī)律，找出焦檳榔新增成分，為闡明焦檳榔“長于消食導(dǎo)滯”的傳統(tǒng)理論提供科學(xué)依據(jù)。
　　4、采用硅膠柱、ODS柱、制備型高效等方法對新增成分進(jìn)行分離，并采用HPLC、LC-MS

5、、1H-NMR法等對新成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并對其生物效應(yīng)進(jìn)行評價。
　　5、采用離體胃腸平滑肌收縮實(shí)驗(yàn)、在體胃排空、腸推進(jìn)等實(shí)驗(yàn)對檳榔生品及其炒制品、去除生物堿部分、生物堿單體以及新增成分的促胃腸運(yùn)動作用進(jìn)行考察，評價生物效應(yīng)與物質(zhì)基礎(chǔ)的相關(guān)性，并進(jìn)行檳榔生品、炒檳榔、焦檳榔和檳榔炭的小鼠急性毒性試驗(yàn)，闡明檳榔炒制緩和藥性的理論。
　　6、探討炒制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)與藥效（毒性）隨炒制程度（時間）的變化規(guī)律。
　　結(jié)果

6、>　　1、采用在線式非接觸紅外測溫系統(tǒng)、自動炒藥機(jī)、色彩色差計對檳榔的炒制過程進(jìn)行了實(shí)時監(jiān)控，保證了炒制品的質(zhì)量均一，規(guī)范了檳榔炒制的工藝參數(shù)，為制定合理、統(tǒng)一、規(guī)范的全國性檳榔炮制工藝提供數(shù)據(jù)支持。
　　2、采用HPLC、MS、1H-NMR等研究技術(shù)，揭示了檳榔炒制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)的變化規(guī)律。通過對比研究三批檳榔炒制過程中檳榔堿、檳榔次堿、去甲基檳榔次堿的含量變化、醚溶性生物堿的含量變化以及鞣質(zhì)的含量變化，揭示了檳榔主要化學(xué)成分的

7、變化規(guī)律：檳榔生物堿和鞣質(zhì)在炒制過程中隨著炒制程度的加深而逐漸降低，至炭品生物堿含量微乎其微，檳榔次堿在炒制過程中先降低而后升高再降低，推測可能與檳榔堿的分解有關(guān)。建立了檳榔炒制過程中不同炒制品的水溶性成分 HPLC指紋圖譜，通過對比分析，首次發(fā)現(xiàn)了檳榔在炒制過程中新增的3個新成分；指紋圖譜中，除新增的三個成分外，其他成分在炒制過程中逐漸降低。以上研究為檳榔飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供數(shù)據(jù)支持。
　　3、首次采用制備型高效液相色譜法對3

8、個新成分進(jìn)行了有效分離，并采用HPLC法、UHPLC-MS、TOF-MS、1H-NMR法等對新成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定新增的三個成分依次為2-羥基-5-羥甲基-2-呋喃甲醛、5-羥甲基糠醛、麥芽酚，并對其進(jìn)行生物效應(yīng)評價。
　　4、研究了焦檳榔“長于消食導(dǎo)滯”科學(xué)內(nèi)涵。胃腸平滑肌試驗(yàn)、胃排空、腸推進(jìn)試驗(yàn)結(jié)果表明，檳榔堿是檳榔促胃腸運(yùn)動的物質(zhì)基礎(chǔ)之一,檳榔堿在0.5310-4～8310-4 mg/ml范圍內(nèi)對腸平滑肌作用逐漸增強(qiáng)，在0

9、.5310-4～1.6310-3mg/ml范圍內(nèi)對胃平滑肌作用顯著增強(qiáng)，高于8310-4 mg/ml后對腸平滑肌作用逐漸下降，高于1.6310-3mg/ml對胃平滑肌作用逐漸下降；檳榔次堿和去甲檳榔次堿無促胃腸運(yùn)動作用。焦品去除生物堿組具有顯著的促胃排空作用和腸推進(jìn)作用以及焦品的促胃排空和腸推進(jìn)作用最強(qiáng)表明，在炒焦過程中產(chǎn)生了具有促胃腸運(yùn)動作用的新物質(zhì)，使焦檳榔的作用最強(qiáng)。因此，可以確定檳榔促胃腸運(yùn)動的物質(zhì)基礎(chǔ)為檳榔堿和檳榔炒制后產(chǎn)生的

10、新物質(zhì)兩部分。
　　5、研究了檳榔炒制緩和藥性的相關(guān)“毒性”。檳榔隨著炒制程度的加深，毒性逐漸降低，檳榔飲片（生品）的LD50為65.69 g/kg，炒黃后LD50為67.18 g/kg，焦品的LD50為71.83g/kg，炭品由于未有小鼠死亡，無法得出LD50，急性毒性大小順序依次為檳榔飲片（生品）>檳榔炒黃>焦檳榔>檳榔炒炭。
　　6、探討了有效成分含量變化與生物效應(yīng)變化的相關(guān)性。以炒制時間為橫坐標(biāo)，以檳榔堿含量、藥效強(qiáng)

11、度為縱坐標(biāo)，建立了炒制程度——檳榔堿含量——藥效強(qiáng)度曲線圖，由圖可知，炒焦是檳榔炒制過程中檳榔堿與藥效發(fā)生顯著性變化的拐點(diǎn)；由小鼠急性毒性試驗(yàn)可知，檳榔堿是檳榔的毒性成分，隨著炒制過程中檳榔堿含量的逐漸降低毒性逐漸降低。
　　結(jié)論：本課題研究從檳榔炒制的全過程和規(guī)律性出發(fā)，系統(tǒng)揭示了檳榔炒制過程中物質(zhì)基礎(chǔ)（外觀性狀、化學(xué)成分、指紋圖譜）與生物效應(yīng)（離體胃腸平滑肌運(yùn)動、在體胃腸運(yùn)動、毒性）的變化規(guī)律，為規(guī)范、優(yōu)化檳榔炒制工藝和質(zhì)量標(biāo)

12、準(zhǔn)的制定提供數(shù)據(jù)支持，為闡明檳榔炒制原理和豐富中藥炮制的內(nèi)涵提供了科學(xué)依據(jù)，為其他中藥的炮制原理研究提供新的思路和方法借鑒。首次發(fā)現(xiàn)了檳榔在炒制過程中產(chǎn)生的3個新成分，成功對其有效分離和結(jié)構(gòu)確證，并對其進(jìn)行了生物效應(yīng)評價。檳榔堿是檳榔促胃腸運(yùn)動的物質(zhì)基礎(chǔ)，但不是唯一的物質(zhì)基礎(chǔ)，檳榔在炒制中產(chǎn)生的某類新成分，與檳榔堿協(xié)同作用，使焦檳榔的生物效應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于檳榔生品及其他炒制品；檳榔及其炒制品水煎液的急毒試驗(yàn)結(jié)果表明，檳榔生物堿是檳榔的毒性成分

13、，檳榔及其炒制品作為藥品進(jìn)行臨床使用,安全性較高。
　　創(chuàng)新點(diǎn)
　　1、思路創(chuàng)新——動態(tài)觀的炒制全過程研究設(shè)計與觀察
　　本課題立題與思路強(qiáng)調(diào)研究炒制以“動態(tài)觀、全過程、規(guī)律性”出發(fā)，即從揭示檳榔飲片物質(zhì)基礎(chǔ)與生物效應(yīng)在炒制過程中的變化規(guī)律出發(fā)，研究炒制過程中檳榔生品與不同炒制品的物質(zhì)基礎(chǔ)和生物效應(yīng)以及炒制原理的思路（與現(xiàn)有研究思路相比明顯有別）具創(chuàng)新性。
　　2、技術(shù)與方法創(chuàng)新——新技術(shù)與新方法的運(yùn)用