墨旱蓮防治肺癌物質(zhì)基礎(chǔ)組分結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、肺癌已成為嚴(yán)重威脅人類健康的腫瘤之一。長(zhǎng)期以來，對(duì)于肺癌采取預(yù)防和治療相結(jié)合的治療手段已成為降低肺癌發(fā)病率和死亡率的共識(shí)。中藥在腫瘤的防治方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，已成為篩選腫瘤防治藥物的一個(gè)重要來源。墨旱蓮為中藥抗腫瘤復(fù)方“三草方”中的一味重要中藥，但對(duì)其單味藥抗癌活性方面的研究甚少。本文采用多種模型對(duì)墨旱蓮防治肺癌的藥效進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并以“組分結(jié)構(gòu)”理論為指導(dǎo)，對(duì)其物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了解析和優(yōu)化。并對(duì)其吸收較差的活性組分，以藥劑學(xué)的手段改善其口服

2、生物利用度。具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　1、墨旱蓮防治肺癌藥效評(píng)價(jià)
　　采用C57小鼠接種Lewis細(xì)胞評(píng)價(jià)多個(gè)產(chǎn)地墨旱蓮提取物對(duì)腫瘤抑制作用。不同產(chǎn)地墨旱蓮對(duì)C57荷瘤小鼠都有一定抑制作用，其中以河南產(chǎn)地抑瘤率最高，在給藥量為10g生藥/kg/天時(shí)，腫瘤抑制率達(dá)到45.21±4.62％。
　　以A549細(xì)胞模型對(duì)墨旱蓮抗肺癌活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)墨旱蓮提取物對(duì)A549細(xì)胞有一定抑制作用，并呈濃度依賴性，其IC50為308μg

3、生藥/mL。墨旱蓮提取物濃度相當(dāng)于生藥1000μg/mL時(shí)，對(duì)A549細(xì)胞24h凋亡率達(dá)到47.55％。表明，墨旱蓮提取物有誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用。墨旱蓮提取物作用于A549細(xì)胞24小時(shí)之后，促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase9、cleaved-caspase3和cleaved-caspase8的表達(dá)均有所增高;而與對(duì)照組相比，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下降。提示墨旱蓮誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡可能與線粒體途徑有關(guān)。
　　

4、建立香煙誘導(dǎo)NHBE細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)墨旱蓮對(duì)正常肺上皮細(xì)胞的保護(hù)作用。墨旱蓮提取物能顯著提高香煙誘導(dǎo)的NHBE細(xì)胞的存活率，并呈一定濃度依賴性?？寡趸笜?biāo)顯示，香煙誘導(dǎo)的NHBE細(xì)胞中，SOD、CAT、和GSH的活力顯著下降，而MDA的含量增加;墨旱蓮作用于細(xì)胞后，細(xì)胞中SOD、CAT、、GSH水平和MDA的含量向正常方向調(diào)節(jié)。采用Western blot對(duì)COX-2和ICAM-1進(jìn)行測(cè)定，香煙提取物作用于NHBE細(xì)胞后，炎癥指標(biāo)COX-

5、2和ICMA-1的表達(dá)顯著提高，而墨旱蓮作用于細(xì)胞后，炎癥指標(biāo)COX-2和ICMA-1的表達(dá)顯著降低，并向正常方向接近。綜合幾種模型的評(píng)價(jià)結(jié)果，墨旱蓮對(duì)肺癌的防治有一定積極的作用。
　　2、墨旱蓮組分的分離富集
　　應(yīng)用不同型號(hào)大孔樹脂結(jié)合自動(dòng)純化制備系統(tǒng)分離富集墨旱蓮中的各組分。利用UPLC/Q-TOF MS對(duì)各組分中的11種指標(biāo)成分進(jìn)行檢識(shí)，結(jié)果實(shí)驗(yàn)成功富集到了墨旱蓮中的酚酸組分、黃酮組分、香豆草醚組分和三萜組分。并首次

6、在墨旱蓮中發(fā)現(xiàn)了異槲皮苷、異綠原酸A和異綠原酸C。
　　3、墨旱蓮組分結(jié)構(gòu)優(yōu)化研究
　　中藥不論單味藥還是復(fù)方，其藥效的發(fā)揮主要還是依靠組分的整體協(xié)同作用?！敖M分結(jié)構(gòu)”理論認(rèn)為，藥材中的各組分應(yīng)該存在協(xié)同增效作用，各組分不是簡(jiǎn)單的組合，應(yīng)該存在一定結(jié)構(gòu)比例。我們利用均勻設(shè)計(jì)的手段，以A549細(xì)胞模型結(jié)合香煙誘導(dǎo)NHBE細(xì)胞模型對(duì)墨旱蓮各組分間結(jié)構(gòu)進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)墨旱蓮中酚酸、黃酮、香豆草醚和三萜組分都是其發(fā)揮藥效不可缺少的組

7、分，并初步得到四類組分間不同結(jié)構(gòu)的優(yōu)化組，即酚酸∶黃酮∶香豆草醚∶三萜=11∶9∶10∶18～22。
　　實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步選用C57小鼠接種Lewis細(xì)胞對(duì)優(yōu)化的墨旱蓮組分結(jié)構(gòu)進(jìn)行驗(yàn)證。綜合評(píng)價(jià)給藥組的抑瘤率和臟器指數(shù)，初步將墨旱蓮防治肺癌的優(yōu)化組分結(jié)構(gòu)設(shè)為酚酸(∶)黃酮(∶)香豆草醚∶三萜=11∶9∶10∶18。
　　4、納米碳用于改善墨旱蓮中黃酮組分口服生物利用度的研究
　　在墨旱蓮的四類組分中，黃酮類組分在藥劑學(xué)分類中

8、屬于第二類，口服生物利用度較差。實(shí)驗(yàn)首先以墨旱蓮黃酮組分中的芹菜素單體為例，對(duì)納米碳為載體的固體分散體改善黃酮類組分口服生物利用的方案進(jìn)行了可行性驗(yàn)證。結(jié)果表明，芹菜素∶納米碳粉(1∶6)制備的固體分散體中，芹菜素能夠以無定型狀態(tài)存在，體外溶出度顯著增加。大鼠口服藥物后，芹菜素-納米碳粉固體分散體與純芹菜素原料藥相比，Cmax和AUC0-T都有顯著改善?？诜鄄怂卦纤幍腃max為1.33±0.24μg/mL，AUC0-T為11.76±

9、1.52μg h/mL;然而在芹菜素-納米碳粉固體分散體中，Cmax和AUC0-T分別提高到了3.26±0.33μg/mL和21.48±2.83μg，使用固體分散體將芹菜素的相對(duì)口服生物利用度提高了近183％。對(duì)納米碳粉的腸道毒性考查發(fā)現(xiàn)大鼠連續(xù)灌胃納米碳粉2周后，無明顯腸道毒性。以上結(jié)果證明，以納米碳粉為載體的固體分散體可以用來改善黃酮類化合物的口服生物利用度。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步以納米碳為載體，制備了墨旱蓮中黃酮組分(FC)的固體分散體。以黃