多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定.pdf

1、腦多頭蚴病(Cerebral coenurosis)是由多頭帶絳蟲（Taenia multiceps）的中絳期幼蟲腦多頭蚴（Coenurus cerebralis）引起的一種人畜共患寄生蟲病。腦多頭蚴可寄生于牛、羊等家畜的腦、脊髓等中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使宿主產(chǎn)生神經(jīng)癥狀，甚至導(dǎo)致死亡，人作為中間宿主亦可偶發(fā)腦多頭蚴病。因此，該病不僅給畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且威脅著人體健康。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使用疫苗防治絳蟲蚴病取得了一定

2、的成效，成為目前研究的熱點(diǎn)。
　　本研究以多頭帶絳蟲基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增TmAdh基因家族成員基因組序列，獲得6個含有N端信號肽和1個FnⅢ結(jié)構(gòu)域的基因序列。利用生物信息學(xué)軟件對TmAdh家族成員進(jìn)行預(yù)測分析，發(fā)現(xiàn)其都由3個外顯子和2個內(nèi)含子組成;序列比對顯示其蛋白序列一致性在44.9-99.2％;進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)該蛋白屬于帶科絳蟲免疫保護(hù)性抗原家族的一個新的亞類。以腦多頭蚴cDNA為模板擴(kuò)增出TmAdh1、TmAdh2和T

3、mAdh4 cDNA基因片段，TmAdh3基因片段人工合成，將TmAdh1-4基因片段連接至原核表達(dá)載體pGEX4T-1進(jìn)行原核表達(dá)。成功表達(dá)出產(chǎn)物大小約為39.0、38.1、38.9和37.8ku的重組蛋白。利用Western-blot分析TmAdh1-4重組蛋白的反應(yīng)原性，結(jié)果表明腦多頭蚴自然感染綿羊血清與TmAdh3重組蛋白反應(yīng)明顯，而與TmAdh1、TmAdh2和TmAdh4重組蛋白反應(yīng)不明顯。細(xì)胞黏著活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明重組蛋白T

4、mAdh1-4對中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和正常鼠腎細(xì)胞(NRK)都有黏著活性。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TmAdh1主要分布在腦多頭蚴原頭節(jié)的上皮、頂突（主要在小鉤）、組織內(nèi)部有零星分布;TmAdh2主要分布在腦多頭蚴原頭節(jié)的組織內(nèi)部、頂突、小鉤、上皮有少量分布;TmAdh3主要分布在腦多頭蚴原頭節(jié)的頂突、小鉤、上皮、組織內(nèi)部零星分布;TmAdh4大量分布在腦多頭蚴原頭節(jié)的組織內(nèi)部、頂突和小鉤上。重組蛋白的動物免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TmAd