GSDMDC家族新基因GSDML的克隆，表征和功能研究.pdf

1、本文為尋找新的腫瘤相關(guān)基因，從22周孕齡人胎肝中克隆鑒定了一個(gè)新基因GSDML(Gasdermin-like)，其功能未知，序列分析表明它是GSDMDC家族的新成員，推測(cè)其可能也是腫瘤相關(guān)基因。GSDML基因定位于17q21.2，在同一區(qū)域定位的還有在惡性腫瘤細(xì)胞中經(jīng)常擴(kuò)增的erbB2基因。GSDML cDNA全長(zhǎng)1518bp，編碼403個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量45kD。GSDML蛋白含有一個(gè)Gasdermin結(jié)構(gòu)域，一個(gè)潛在的核定位信號(hào)和

2、兩個(gè)可能與核受體相互作用的LXX(L/I)L基序(氨基酸58-62，325-329)。從胎肝cDNA文庫(kù)中克隆GSDML基因時(shí)，還發(fā)現(xiàn)其它3種短的剪接異構(gòu)體形式，按預(yù)測(cè)蛋白分子量由大到小，一并命名為GSDML1、GSDML2、GSDML3、GSDML4。Dot Blot顯示GSDML在76種人組織/細(xì)胞中，只在唾液腺中表達(dá)。針對(duì)GSDML，蛋白序列的抗原表位，制備了GSDML的兔多抗和小鼠單抗，利用這些抗體檢測(cè)到多種人源腫瘤細(xì)胞系均有G

3、SDML內(nèi)源性表達(dá)，而在鼠來(lái)源的NIH3T3和猴來(lái)源的COS-7細(xì)胞中未檢測(cè)到其表達(dá)。此外，在HEK293、HepG2、MCF7、HNE1、HNE2細(xì)胞中檢測(cè)到GSDML較短形式的異構(gòu)體蛋白。免疫組織化學(xué)檢測(cè)子宮頸癌和肝癌組織芯片，在子宮頸癌臨床樣本中，GSDML在癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁和癌遠(yuǎn)端；在肝癌臨床樣本中癌、癌旁、癌遠(yuǎn)端，GSDML表達(dá)無(wú)顯著性差別。因此GSDML蛋白可能是子宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中重要的促發(fā)蛋白，它的過(guò)表達(dá)在高

4、危地區(qū)可能增加子宮頸癌的發(fā)生幾率。同時(shí)也提示，GSDML可能與生殖系統(tǒng)特異性腫瘤相關(guān)。 為進(jìn)一步揭示其中的分子機(jī)制。結(jié)合GSDML含有兩個(gè)潛在的核受體結(jié)合基序的特征，探討了GSDML與核受體家族主要成員的功能關(guān)聯(lián)。利用免疫共沉淀技術(shù)揭示GSDML可以特異性的與雌激素受體α(ERα)和甲狀腺激素受體α(TRα)以配體非依賴的方式相互作用，而不與雄激素受體α(ARα)，肝細(xì)胞核因子4α(HNF4α)和糖皮質(zhì)激素受體(GR)相互作用。

5、利用RNA干擾敲低GSDML的表達(dá)，可以降低細(xì)胞內(nèi)ERα的活性及對(duì)雌激素的響應(yīng)能力，提示GSDML可能對(duì)ERα有一定的調(diào)控作用。這也是首次發(fā)現(xiàn)GSDMDC家族與核受體家族之間的關(guān)聯(lián)。進(jìn)而，利用MTr法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線表明穩(wěn)定表達(dá)GSDML1的NIH3T3細(xì)胞比pcDNA3.1-Myc空載體的NIH3T3細(xì)胞生長(zhǎng)速度顯著加快(P<0.001)，但卻不能使NIH3T3穩(wěn)定株細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化以致獲得集落形成的能力。這表明，GSDML基因可能特