基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1及其受體在糖尿病大鼠肝纖維化中的作用.pdf

1、目的：通過測定2型糖尿病大鼠肝組織中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)及其受體(CXCR4)的表達(dá)，探討2型糖尿病肝纖維化與SDF-1及CXCR4的關(guān)系。觀察羅格列酮對糖尿病肝纖維化的作用以及對SDF-1及CXCR4表達(dá)的影響，從而為治療糖尿病肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：通過高脂飲食結(jié)合一次性腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ，30mg/kg，i.p.)建立2型糖尿病大鼠模型，并設(shè)立正常對照組。10w末，行高胰島素正常葡萄糖鉗

2、夾試驗(yàn)，測定葡萄糖輸注率(GIR)，證實(shí)糖尿病動物模型胰島素抵抗的存在；經(jīng)腹主靜脈取血檢測空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。隨后將糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組和羅格列酮干預(yù)組(RSG，1.42mg/(kg·d)，灌胃)。24周末腹主靜脈取血測FBG、FINS、TG、TC、ALT、AST和糖化血紅蛋白(HbAlc)。分別留取肝臟組織供HE染色觀察肝臟組織

3、形態(tài)；Masson染色和羥脯氨酸(HYP)含量測定評估肝臟組織膠原沉積情況；應(yīng)用免疫組化測定SDF-1及CXCR4的定位和蛋白表達(dá)水平；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測SDF-1及CXCR4 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.一般狀況
　　對照組大鼠飲食、活動如常；糖尿病組大鼠出現(xiàn)了多尿、多飲、多食癥狀，并逐漸加重。色澤灰暗，毛發(fā)稀疏，行為遲鈍；羅格列酮干預(yù)組的大鼠上述癥狀與糖尿病組大鼠相似。

4、　　2.血糖鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)果對照組大鼠GIR為11.34±0.76mg/kg/min，糖尿病大鼠GIR為5.45±0.84mg/kg/min，糖尿病組大鼠GIR明顯低于對照組(P<0.01)，表明糖尿病組大鼠存在胰島素抵抗。
　　3.生化指標(biāo)的改變10周末，糖尿病組大鼠的FBG、FINS、TG、TC(P<0.05)、ALT較同期對照組均顯著升高(P<0.01)。24周末糖尿病組大鼠的FBG、FINS、TG、TC、ALT和HbA1C較2

5、4周末對照組大鼠均顯著升高(P<0.01)。羅格列酮干預(yù)組大鼠的FINS、TG、TC和ALT與24周末糖尿病組大鼠相比明顯下降(P<0.01)，但FBG、HbA1c和AST與24周末糖尿病組大鼠無差異(P＞0.05)。
　　4.肝組織HYP測定結(jié)果24周末糖尿病組大鼠肝組織HYP含量(229.99±2.96μ/(g·prot))較同期對照組(138.07±6.05μg/(g·prot))明顯升高(P<0.01)；24周末對照組大鼠

6、較羅格列酮干預(yù)組大鼠HYP含量(189.64±6.00μg/(g·prot))少(P<0.01)；羅格列酮干預(yù)組大鼠較24周末糖尿病組大鼠HYP含量明顯減少(P<0.01)。
　　5.Masson染色結(jié)果對照組大鼠的匯管區(qū)及中央靜脈區(qū)可見少量膠原纖維分布，膠原面密度為0.0052±0.0011。24周末糖尿病組大鼠匯管區(qū)及中央靜脈區(qū)膠原物質(zhì)較對照組顯著增多，膠原面密度為0.1215±0.0018，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)

7、。羅格列酮干預(yù)組膠原纖維增生程度較糖尿病組顯著減輕，膠原面密度為0.0865±0.0023，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　6.HE染色結(jié)果對照組大鼠肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細(xì)胞排列整齊，竇周隙正常。24周末糖尿病組大鼠肝細(xì)胞索排列紊亂，竇周隙增寬，肝細(xì)胞壞死，大量脂肪空泡形成，炎性細(xì)胞增多，纖維組織增生。羅格列酮干預(yù)組大鼠上述改變均較糖尿病組顯著減輕。
　　7.SDF-1及CXCR4免疫組化結(jié)果對照

8、組大鼠肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見SDF-1弱陽性表達(dá)，陽性染色光密度0.1231±0.0089；24周末糖尿病組大鼠SDF-1表達(dá)較同期對照組明顯增多，陽性染色光密度0.2768±0.0089，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；羅格列酮干預(yù)組大鼠的肝細(xì)胞SDF-1呈強(qiáng)陽性表達(dá)，較對照組和24周末糖尿病組大鼠顯著增加，陽性染色光密度0.3669±0.0110，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。對照組大鼠肝細(xì)胞胞漿和胞膜內(nèi)可見CXCR4弱陽性表達(dá)

9、，陽性染色光密度0.1089±0.0078；24周末糖尿病組大鼠CXCR4表達(dá)較同期對照組明顯增多，陽性染色光密度0.2954±0.0079，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；羅格列酮干預(yù)組大鼠的肝細(xì)胞內(nèi)CXCR4呈強(qiáng)陽性表達(dá)，較對照組和24周末糖尿病組大鼠顯著增加，陽性染色光密度0.3994±0.0097，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　8.各組大鼠肝組織SDF-1及CXCR4 mRNA的相對表達(dá)量SDF-1 mRN

10、A于對照組、糖尿病組、羅格列酮干預(yù)組測定值分別為0.64±0.05，0.82±0.04，1.02±0.06；糖尿病組較對照組SDF-1 mRNA表達(dá)有所增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；羅格列酮干預(yù)組與對照組和糖尿病組大鼠相比，SDF-1 mRNA表達(dá)量明顯增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。CXCR4 mRNA于對照組、糖尿病組、羅格列酮干預(yù)組測定值分別為0.11±0.02，0.15±0.01，0.19±0.02；糖尿病

11、組較對照組CXCR4 mRNA表達(dá)有所增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；羅格列酮干預(yù)組與對照組和糖尿病組大鼠相比，CXCR4 mRNA表達(dá)量明顯增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.高脂飲食結(jié)合一次性腹腔注射小劑量STZ使大鼠血糖升高，血糖鉗夾試驗(yàn)顯示GIR明顯下降，提示2型糖尿病大鼠模型塑造成功。此模型大鼠光鏡下可見肝組織形態(tài)改變，Masson染色及肝組織羥脯氨酸測定證實(shí)大鼠肝組織存在膠原