帕立骨化醇在糖尿病腎病大鼠腎小管間質(zhì)纖維化的作用研究.pdf

1、目的:
　　流行病學(xué)顯示，我國糖尿病腎?。―KD)已迅速上升為終末期腎病的重要原因，在透析患者中比例僅次于慢性腎小球腎炎。腎小管在 DKD初期便發(fā)生改變，伴隨著間質(zhì)纖維化的出現(xiàn)，明顯增加腎臟的不良預(yù)后。既往研究發(fā)現(xiàn)，腎小管-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT)和腎小管間質(zhì)纖維化密切相關(guān)，且受多種內(nèi)在機制共同調(diào)控，包括 Klotho、Wnt/β-catenin及TGF-β信號途徑。因此，通過調(diào)控以上目標蛋白的表達或信號途徑的傳導(dǎo)或可成為抑制 DKD

2、腎小管上皮 EMT及腎間質(zhì)纖維化的重要途徑。
　　本研究利用帕立骨化醇干預(yù) DKD大鼠模型，以探討其對腎小管上皮 EMT及小管間質(zhì)纖維化的作用及可能機制，最終為 DKD腎臟纖維化的防治提供新線索。
　　方法:
　　利用鏈脲佐菌素建立大鼠糖尿病腎病模型。將 DKD大鼠按隨機數(shù)字表法分為：(1)帕立骨化醇干預(yù)組（P組)：帕立骨化醇溶于丙二醇中，于造模成功后第2 d給藥，劑量為0.4μg.kg-1，3次/周；(2)糖尿病腎病

3、組（D組)：給予等體積的丙二醇腹腔注射。設(shè)置正常對照組(C組)：干預(yù)方法同 D組。帕立骨化醇連續(xù)干預(yù)4周或12周后，取各組大鼠血、尿及腎組織標本。檢測一般生化指標；取腎組織進行病理學(xué)檢查；利用免疫組化及 Western印跡技術(shù)檢測腎組織 E-鈣粘蛋白（E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、纖連蛋白（FN)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、β-catenin、Wnt-4及 Klotho蛋白的表達；并進行各觀察指標間

4、的相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　(1)一般指標：D組大鼠 SCr、BUN、24 h尿蛋白及 U A C R水平均較 C組上升，而P組均較 D組下降(均P<0.05)；與 C組比較，D組血磷與 iPTH水平均上升，血鈣下降，但相較于D組，P組血磷與 iPTH均回降，血鈣回升(均P<0.05)。
　　(2)病理學(xué)檢查：C組大鼠腎小管結(jié)構(gòu)完整清晰，無明顯病理改變；D組可見腎小管間質(zhì)局部炎癥細胞浸潤，腎小管上皮細胞脫落，小管擴

5、張，基底膜斷裂，與C組比較，纖維化面積增大（P<0.05)，而 P組較 D組病理改變較輕，纖維化面積較小（P<0.05)。
　　(3)各組腎組織 E-cadherin、α-SMA及 FN蛋白的表達：D組大鼠腎組織 E-cadherin蛋白表達低于C組，而 P組高于D組(均P<0.05)；與C組比較，D組大鼠腎組織α-SMA與 FN蛋白表達均明顯增加，而 P組表達均較 D組減少(均P<0.05)。
　　(4)各組腎組織 TGF

6、-β1、Wnt4、β-catenin及 Klotho蛋白的表達：與 C組比較，D組Klotho蛋白水平降低，而P組較 D組水平升高(均 P<0.05)；與 C組比較，D組TGF-β1、Wnt-4和β-catenin蛋白表達水平顯著上升，而與 D組比較，P組以上蛋白的水平均較 D組下降(均 P<0.05)。
　　(5)各觀察指標間相關(guān)性分析：Klotho蛋白水平和E-cadherin蛋白水平呈正性相關(guān)（r=0.924，P<0.05)

7、，而與纖維化面積、α-SMA、FN、TGF-β1、Wnt-4及β-catenin均呈負相關(guān)（r=-0.886，P<0.05;r=-0.806，P<0.05;r=-0.623，P<0.05;r=-0.749，P<0.05;r=-0.855，P<0.05;r=-0.881，P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)帕立骨化醇可抑制 DKD腎小管間質(zhì)纖維化，改善腎功能，同時減輕尿蛋白，對腎臟具有一定的保護作用。
　　(2)帕立