視網(wǎng)膜色素變性患者自體誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞系的建立與應(yīng)用.pdf

1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：200601086視網(wǎng)膜色素變性患者自體誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞系的建立與應(yīng)用專業(yè)年級(jí)：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2006級(jí)姓名：王繹忱導(dǎo)師：董方田(教授)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)眼科完成日期：2014年6月摘要背景：視網(wǎng)膜變性疾病是一類以進(jìn)行性視功能下降為臨床特征的疾病，具有遺傳性或后天獲得性，是臨床上多見(jiàn)而又難治的一類致盲性眼病。視網(wǎng)膜色素變性作為最常見(jiàn)的遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病，其遺傳方式多樣，致病基因

2、多種，深入的致病機(jī)制仍然不明確，目前尚無(wú)有效的治療方法。對(duì)于視網(wǎng)膜變性疾病，由于其取材的受限性，難以建立體外細(xì)胞研究模型。2007年日本科學(xué)家Yamanaka等人發(fā)明了人類體細(xì)胞誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞(humaninducedpluripotentstemcell，hiPSC)技術(shù)。通過(guò)這一技術(shù)，理論上可產(chǎn)生大量的與胚胎干細(xì)胞同等分化潛能的多潛能干細(xì)胞。利用患者自身的體細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的hiPS細(xì)胞及其分化產(chǎn)生的視網(wǎng)膜細(xì)胞，可為視網(wǎng)膜變性疾病建

3、立體外的細(xì)胞研究模型。hiPS細(xì)胞以及其分化產(chǎn)生的各類視網(wǎng)膜細(xì)胞還可在各類視網(wǎng)膜變性疾病中探索干細(xì)胞替代治療，為攻克此類難治的致盲性眼病帶來(lái)希望。目的：本課題研究目的在于：(1)將視網(wǎng)膜色素變性患者的皮膚成纖維細(xì)胞，通過(guò)導(dǎo)入外源基因，誘導(dǎo)其成為多潛能干細(xì)胞(hjPSC)；(2)在此過(guò)程中探索視網(wǎng)膜變性患者體細(xì)胞重編程的機(jī)制過(guò)程，并為進(jìn)一步向視網(wǎng)膜細(xì)胞的定向分化及機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。材料和方法：本研究取IFTl40基因突變的視網(wǎng)膜色素變性的

4、1名患者及1名正常對(duì)照受試者的皮膚組織樣本進(jìn)行原代培養(yǎng)，建立人皮膚成纖維細(xì)胞系(humandermalfibroblast，HDF)。并取CF1品系小鼠135天胚胎，分離并培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mouseembryonicfibroblast，MEF)，培養(yǎng)至P3代后，經(jīng)絲裂霉素C處理后制成飼養(yǎng)層細(xì)胞(feedercell)。實(shí)驗(yàn)中利用含Oct4、K1f4、Sox2、cMyc四種重組基因的慢病毒質(zhì)粒以及慢病毒包裝質(zhì)粒PVSVG和△89