視網(wǎng)膜色素變性患者視錐桿細(xì)胞同源盒基因突變的研究.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜色素變性（RP）是最常見的遺傳性、致盲性眼底病。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少63個(gè)基因與其有關(guān)。我國(guó)已經(jīng)對(duì)20個(gè)RP相關(guān)基因進(jìn)行了研究，但沒有任何一個(gè)基因能夠單獨(dú)解釋超過5％的RP發(fā)病原因。本次研究的目的是研究視錐-桿細(xì)胞同源盒（cone-rod homebox gene,CRX）基因在寧夏地區(qū)RP患者中的突變頻率及特征，并探討其在RP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：按國(guó)際通用的視網(wǎng)膜色素變性診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所收集到的100例視網(wǎng)膜色素變

2、性患者（包括18例ADRP患者，15例ARRP患者，67例SRP患者），抽取外周靜脈血3～5ml， EDTA抗凝，采用北京天根基因公司生產(chǎn)的試劑盒抽提紅細(xì)胞DNA，按已發(fā)表的CRX基因序列資料，參照Dryja等報(bào)道的方法進(jìn)行PCR引物設(shè)計(jì)，在設(shè)計(jì)引物時(shí)使其擴(kuò)增區(qū)域覆蓋CRX基因的4個(gè)外顯子及其附近拼接位點(diǎn)中的內(nèi)含子，共設(shè)計(jì)合成了4對(duì)引物。聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）擴(kuò)增CRX基因第1～4外

3、顯子基因片段，反應(yīng)結(jié)束后將其產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠（1.5％）電泳，證實(shí) PCR擴(kuò)增的目的片段（大小在253bp～665bp之間）。將所有的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序并進(jìn)行序列分析；并隨機(jī)收集100例正常人進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)。采用Polyphen分析突變導(dǎo)致的氨基酸改變對(duì)CRX蛋白結(jié)構(gòu)和功能的影響，運(yùn)用多因素分析研究CRX基因突變位點(diǎn)對(duì)RP的作用。
　　結(jié)果：在100例RP患者的CRX基因上共檢測(cè)出了5個(gè)變異位點(diǎn)，2個(gè)為同義突變（p.Leu7

4、8 Leu，p.Ala92Ala），3個(gè)為錯(cuò)義突變（p.Ala112Val，p.Gly122Asp and p.Thr187Ile）,其中p.Leu78 Leu，p.Ala92Ala和p.Thr187Ile為新發(fā)現(xiàn)的突變。其余突變位點(diǎn)均證實(shí)為CRX基因的多態(tài)性。p.Thr187Ile突變位點(diǎn)僅在2例ARRP患者身上檢出，在正常對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)突變。對(duì)此位點(diǎn)進(jìn)行PSIC預(yù)測(cè)，為非致病性突變，多因素Logistic回歸進(jìn)一步分析p.Thr