復(fù)方中藥芪參益氣滴丸化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)理研究.pdf

1、復(fù)方中藥是當(dāng)今中醫(yī)臨床治療用藥的重要手段，一個(gè)療效經(jīng)得起實(shí)踐檢驗(yàn)的復(fù)方中藥蘊(yùn)含著科學(xué)的配伍規(guī)律，體現(xiàn)著中醫(yī)學(xué)獨(dú)特的醫(yī)理和思辨。但由于復(fù)方中藥的復(fù)雜性，大部分復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理機(jī)制尚不明確，嚴(yán)重影響了中醫(yī)藥的推廣和使用。如何明確復(fù)方中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制是當(dāng)前中藥現(xiàn)代化亟待解決的問(wèn)題。芪參益氣滴丸是以現(xiàn)代科技提取丹參、黃芪、三七和降香中的有效成分精制而成的滴丸制劑，具有劑量小、服用方便、溶出速度快，可經(jīng)粘膜吸收入血、生物利用度

2、高及無(wú)胃腸刺激、無(wú)明顯毒副作用的特點(diǎn)。能夠顯著改善心肌損傷、心功能減退的各種癥狀，適用于慢性心功能不全、心肌炎及后遺癥、心肌梗死恢復(fù)期、心肌纖維化等病癥的治療。但其藥效作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和作用的機(jī)理尚不清楚，需要結(jié)合現(xiàn)代新技術(shù)向更深層次的研究。
　　 本研究引入整合化學(xué)物質(zhì)組學(xué)的整體系統(tǒng)生物學(xué)研究策略，全面系統(tǒng)的探討芪參益氣滴丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制。首先，采用化學(xué)物質(zhì)組學(xué)(Chemomics)的研究方法，對(duì)其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行

3、系統(tǒng)的研究。應(yīng)用先進(jìn)的UPLC/Q-TOF分離分析技術(shù)，對(duì)芪參益氣滴丸的整體化學(xué)物質(zhì)組(Globalchemome)進(jìn)行了深入研究，共分析鑒定了藥物中的44個(gè)化學(xué)成分，達(dá)到了從整體上明晰藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的目的。在此基礎(chǔ)上，建立了高效、快速的用于藥物質(zhì)量控制的指紋圖譜，并采用主成分分析法(PCA)對(duì)不同批次芪參益氣滴丸的質(zhì)量進(jìn)行研究，確定了藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)為降香揮發(fā)油成分，建立了對(duì)其質(zhì)量控制的數(shù)學(xué)模型。
　　 在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研

4、究中，首先采用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)計(jì)算(in Silico)、對(duì)芪參益氣滴丸中可被機(jī)體吸收的成分進(jìn)行計(jì)算預(yù)測(cè)，確定了其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)中可能的16種有效成分；然后分別采用外翻腸囊實(shí)驗(yàn)和Caco-2單層細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等體外研究（inVitro）的方法，在離體器官水平和細(xì)胞水平對(duì)芪參益氣滴丸的吸收進(jìn)行研究，確定了42種可被吸收的原型成分和6種代謝產(chǎn)物；進(jìn)而在活體動(dòng)物水平采用體內(nèi)(in Vivo)研究的方法，對(duì)大鼠灌胃給藥前后的血漿、尿液和糞便總成分指紋圖譜進(jìn)行

5、分析，通過(guò)灌胃前后的對(duì)比找出芪參益氣滴丸被吸收入血的成分。最后，通過(guò)分析對(duì)比芪參益氣滴丸分別在計(jì)算水平、細(xì)胞水平、離體器官水平以及動(dòng)物水平能夠被吸收入血的成分和代謝產(chǎn)物，通過(guò)四個(gè)逐步深入的層次的研究相互輔助，相互驗(yàn)證，確定了芪參益氣滴丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 在此基礎(chǔ)之上，以Caco-2單層細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，在體外吸收的層面上考察了芪參益氣滴丸藥材配伍對(duì)于主要成分吸收的影響。實(shí)驗(yàn)共選取四味藥材中具有代表性的十種主要成分為考察對(duì)象，

6、分別考察其在單獨(dú)給藥、與其它藥材配伍和整體復(fù)方給藥時(shí)的吸收情況。結(jié)果顯示，丹參、三七與黃芪、降香配伍應(yīng)用能增加酚酸類和皂苷類成分的吸收速率，減慢黃芪和降香揮發(fā)油有效成分吸收速率。丹參、三七有效成分吸收加快有利于增強(qiáng)活血化瘀效果，緩解臨床癥狀；黃芪有效成分吸收速率減慢則在不影響活血化瘀效果基礎(chǔ)之上更增補(bǔ)中益氣之功，揮發(fā)油減慢吸收速率則更發(fā)揮其佐使之功。
　　 在明確芪參益氣滴丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)上，采用代謝組學(xué)的研究方法對(duì)給藥干預(yù)心肌梗

7、死大鼠的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物變化進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，藥物干預(yù)組與模型組分離，靠近假手術(shù)組，從代謝角度證明了大鼠心肌梗死模型制備的質(zhì)量和芪參益氣滴丸對(duì)于心肌梗死疾病的治療作用。實(shí)驗(yàn)篩查出組間差異性顯著的25個(gè)潛在生物標(biāo)志物。涉及能量代謝、磷脂代謝、脂肪酸代謝紊亂以及其導(dǎo)致的血小板聚集等多個(gè)方面的代謝障礙，可能是心肌梗死發(fā)病與治療的重要機(jī)制。
　　 通過(guò)本項(xiàng)目研究，基本明確芪參益氣滴丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并從代謝角度初步探討了其作用機(jī)制，為