Slit2-Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表在及臨床意義.pdf

1、目的:在顱內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤中最常見和死亡率最高的是腦膠質(zhì)瘤，我國也是腦膠質(zhì)瘤高發(fā)病的國家之一，腦膠質(zhì)瘤的年發(fā)病人數(shù)以及病人的年死亡數(shù)在所有的惡性腫瘤中位居前茅，其呈侵襲性生長、廣泛浸潤正常組織是膠質(zhì)瘤的特點(diǎn)之一，其侵襲性生長、廣泛浸潤給治療帶來了難題，并成為一個(gè)世界性的難治疾病，也是該病病人病死率高的重要原因。即便是采用手術(shù)切除，結(jié)合放射治療、化學(xué)藥物治療等綜合的治療方案，但患者的中位生存期也非常短暫，往往不會超過一年。醫(yī)學(xué)科研人員為了

2、進(jìn)一步改善惡性腦膠質(zhì)瘤治療的預(yù)后效果，不間斷的試圖研發(fā)具有診斷意義和/或治療價(jià)值的新的分子生物標(biāo)記物，但是均未取得讓人滿意的成效。
　　在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及其惡化過程中由多種因素、多種基因共同參與、共同作用。腦膠質(zhì)瘤是發(fā)病率最高的顱內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤，膠質(zhì)瘤的發(fā)生與多種原癌基因、凋亡基因以及抑癌基因均有著密切的關(guān)系，這些基因可以在腫瘤細(xì)胞的增殖及凋亡過程中的任何環(huán)節(jié)起作用，細(xì)胞凋亡的抑制或平衡的失調(diào)，均可以導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的過度增生，從

3、而促使腫瘤的生長，影響腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后。隨著生物學(xué)研究成果的不斷更新，大量的細(xì)胞粘附分子、水解蛋白酶等蛋白分子的生物學(xué)作用被發(fā)現(xiàn)，其在顱內(nèi)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及轉(zhuǎn)移過程中的作用機(jī)制也陸續(xù)被闡明，但是有關(guān)其在腦膠質(zhì)瘤中作用及作用機(jī)制的相關(guān)報(bào)道卻很少，因此有必要從分子水平著手，深入地研究膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤生長及轉(zhuǎn)移等機(jī)制。
　　近年來的研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)遷移因子Slit2/Robol與惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲以及血管生成具有密切的

4、關(guān)系。近些年實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Slit-Robo信號系統(tǒng)在惡性腫瘤的新生血管形成中發(fā)揮著重要作用，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的Slit2可以刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體Robo1進(jìn)行表達(dá)，可誘導(dǎo)血管生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長。目前關(guān)于Slit2/Robo1的研究主要集中在鼻咽癌、直腸癌、胃癌等消化道腫瘤及乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌等生殖系腫瘤中。關(guān)于它們在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用、對膠質(zhì)瘤生成及預(yù)后是否具有協(xié)同性作用，在國內(nèi)外尚未見報(bào)道。因此深入研究Slit2/R

5、obo1在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況、作用機(jī)制及其與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展及臨床病理之間的關(guān)系，可能為今后腦膠質(zhì)瘤的診斷、靶向治療及預(yù)后提供新的治療思路，并將成為針對膠質(zhì)瘤遷移、浸潤治療的新靶點(diǎn)。
　　方法:隨機(jī)選取40例于2013年11月至2014年1月在河北醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科行手術(shù)切除的不同級別的腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本。按照WHO2007年中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，將19例Ⅰ～Ⅱ級膠質(zhì)瘤標(biāo)本分為低級別組;將21例Ⅲ～Ⅳ級膠質(zhì)瘤標(biāo)本分

6、為高級別組，所有入選標(biāo)本的病歷資料完整且均有本院病理檢查證實(shí)。對照組10例正常組織標(biāo)本取自顱腦外傷或者腦出血患者接受手術(shù)內(nèi)減壓治療切除的腦組織。所有入選的膠質(zhì)瘤標(biāo)本在手術(shù)前均未接受任何放化療等治療。所有標(biāo)本均在手術(shù)切除后立即取材，用10％的福爾馬林液固定后液氮保存。Slit2/Robo1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)情況的檢測采用免疫組織化學(xué)法(IHC)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-PCR)方法。用SPSS16.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

7、r>　　結(jié)果:
　　1、免疫組化結(jié)果顯示:Slit2在正常腦組織中表達(dá)顯著，而在膠質(zhì)瘤中表達(dá)隨著腫瘤級別的增高而降低甚至不表達(dá)。Slit2在正常的腦組織組以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中陽性表達(dá)率分別為100％、84％、28％，表達(dá)率比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);兩兩不同組間表達(dá)率的比較也具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Robo1在正常的腦組織組表達(dá)呈陽性，在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)顯著，且隨膠質(zhì)瘤級別的增高表達(dá)逐漸增強(qiáng)，在

8、正常的腦組織組以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中陽性表達(dá)率分別為80％、100％、100％，表達(dá)率比較具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);兩兩不同組間表達(dá)率的比較也具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Slit2的表達(dá)隨腦膠質(zhì)瘤級別增高而降低，Robo1的表達(dá)隨腦膠質(zhì)瘤級別增高而增高。Slit2-Robo1在正常的腦組織組以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中三組間的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.750，P=0.000）。Slit2-Robo1在正常的

9、腦組織組、低級別組兩組中的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)(r=-0.233，P=0.000)，Slit2-Robo1在正常的腦組織組、高級別組兩組中的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)(r=-0.750，P=0.000)，Slit2-Robo1在低、高兩級別組中表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)(r=-0.977，P=0.000)。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:Slit2在正常的腦組織組中表達(dá)量最高，在膠質(zhì)瘤中隨腫瘤級別的增高，表達(dá)量呈下降趨勢，甚至不表達(dá)。Robo1在正常的腦組織組

10、表達(dá)率最低，在膠質(zhì)瘤中隨腫瘤級別的增高，表達(dá)量呈逐漸增高趨勢。Slit2及Robo1在正常的腦組織中以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中三組間的表達(dá)具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P=0.000)，Slit2在兩兩組間的比較顯示在正常的腦組織組、低級別組兩組之間的表達(dá)差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＜0.05)，而在正常的腦組織組、高級別組兩組之間以及低、高級別組兩組之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＞0.05)，結(jié)果可能與本實(shí)驗(yàn)的樣本含量少有關(guān)。Robo1

11、兩兩組間的比較，具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＜0.05)。Slit2-Robo1在正常的腦組織組以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中三組間的表達(dá)未見相關(guān)性（r=-0.050，P=0.94），結(jié)果可能與本實(shí)驗(yàn)的樣本含量少有關(guān)，但在正常的腦組織組、低級別組兩組中的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)(r=-0.552，P=0.000)，在正常的腦組織中、高級別組中的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)(r=-0.327，P=0.000)，在低、高兩級別組中的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.233，P

12、=0.000）。3.隨訪免疫組化實(shí)驗(yàn)中膠質(zhì)瘤患者證實(shí)Slit2、Robo1均陽性表達(dá)者比Slit2陰性表達(dá)、Robo1陽性表達(dá)的患者生存時(shí)間明顯較長
　　結(jié)論:
　　1、Slit2在正常的腦組織組表達(dá)顯著，在腦膠質(zhì)瘤中隨著腫瘤級別的增高，Slit2的表達(dá)依次降，高級別組中甚至不表達(dá)。在正常的腦組織組以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中三組之間比較和兩兩組間表達(dá)的比較均具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明Slit2與膠質(zhì)瘤的發(fā)生以及惡性程度具

13、有關(guān)系。
　　2、Robo1在正常的腦組織組呈陽性表達(dá)，在各級膠質(zhì)瘤中都呈過表達(dá)。在正常的腦組織以及低、高兩級別組的膠質(zhì)瘤中三組之間和兩兩組間表達(dá)的比較均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著膠質(zhì)瘤的惡性級別增高，Robo1表達(dá)量逐漸增高，表明Robo1可能在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用，與膠質(zhì)瘤的惡性程度具有關(guān)系。
　　3、Slit2的表達(dá)與Robo1的表達(dá)具有顯著負(fù)相關(guān)性，表明在腦膠質(zhì)瘤中Slit2的低表達(dá)和Robo1的高表達(dá)