順鉑對胃癌細(xì)胞株MGC803增殖、凋亡的影響及分子機制的研究.pdf

1、目的:探討順鉑(Cisplatin,CDDP)在體外對胃癌細(xì)胞株MGC803增殖、凋亡的影響及其作用機制,為尋求新的胃癌治療策略提供理論依據(jù).方法:采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),將CDDP分為三個作用濃度:0.1mg/L、1mg/L、10mg/L,用MTT法檢測三組藥物作用于MGC803細(xì)胞12h、24h、48h、72h后的吸光值,觀察各濃度CDDP對胃癌細(xì)胞增殖的影響;采用AO/EB熒光染色檢測藥物作用后各時間點細(xì)胞凋亡率,觀察CDDP對細(xì)胞

2、凋亡的影響;流式細(xì)胞儀測定不同的濃度CDDP作用48小時后細(xì)胞周期變化;RT-PCR檢測小劑量CDDP(1 mg/L)作用于MGC803細(xì)胞前后凋亡相關(guān)基因p53、survivin mRNA的表達(dá)變化.用SKN-q檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析,取檢驗水準(zhǔn)α=0.05.結(jié)果:MTT及熒光染色結(jié)果顯示:CDDP可抑制胃癌細(xì)胞株MGC803的增殖、并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡.高濃度的CDDP(10mg/L)對此胃癌細(xì)胞系的作用有較強的時效依賴關(guān)系,隨著時間的延長,

3、其抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用越強;而低濃度的CDDP(0.1mg/L,1mg/L)在作用24小時后,對細(xì)胞增殖的抑制減弱,細(xì)胞凋亡率無明顯改變.流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示,不同濃度的CDDP作用于MGC803細(xì)胞48h后,細(xì)胞周期均發(fā)生了明顯的改變,表現(xiàn)為,S期比率增加,G2/M期下降,隨著藥物濃度的增加,CDDP對細(xì)胞周期的影響越明顯,具有量效依賴關(guān)系.RT-PCR檢測結(jié)果顯示,MGC803細(xì)胞經(jīng)低濃度的CDDP(1mg/L)作用后,p53、s

4、urvivin mRNA在干預(yù)后12h、24h、48h表達(dá)增強,與對照組相比,差異均具有顯著性(p<0.05).p53mRNA在干預(yù)后12h開始表達(dá)增強,24h達(dá)高峰,接近于對照組的3倍,48h有所下降,其表達(dá)約為對照組的2倍;survivin mRNA表達(dá)從藥物干預(yù)后12小時開始持續(xù)增強,且具有明顯的時間依賴性,作用后48h其表達(dá)接近于對照組的3倍.結(jié)論:CDDP可抑制MGC803細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡;高濃度的CDDP(10mg/L)