根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜蛋白thaumatin基因?qū)霟煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、該試驗構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI<,121>-th,并將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA<,4404>中,然后通過農(nóng)桿菌的介導(dǎo)將thaumatin基因?qū)霟煵葜?并對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了檢測,借以初步探討甜蛋白在植物中的轉(zhuǎn)化和表達(dá)情況,為其今后在更多的植物上應(yīng)用提供依據(jù).實驗結(jié)果如下：1.甜蛋白thaumatin基因植物表達(dá)質(zhì)粒pBI<,121>-th的構(gòu)建與鑒定;利用DNA重組技術(shù),將植物甜蛋白thaumatin基因克隆至植物表達(dá)載體pBI<,121

2、>中,通過酶切、電泳,鑒定thaumatin基因已成功構(gòu)建到植物表達(dá)質(zhì)粒pBI<,121>中.2.pBI<,121>-th通過直接轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA<,4404>中,卡那霉素（Km）平板篩選陽性克隆,有單菌落生長,證明重組質(zhì)粒已轉(zhuǎn)進(jìn)農(nóng)桿菌LBA<,4404>中.3.植株再生體系的建立;采用無菌苗煙草葉片為外植體,以MS為基本培養(yǎng)基,篩選出MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L以誘導(dǎo)不定芽的分化.4.轉(zhuǎn)化體篩選及植株再生;