β-苦瓜素的結(jié)構(gòu)分析與表位預(yù)測.pdf

1、惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的疾病,多年來對其治療一直停留在放療、化療、手術(shù)、藥物等傳統(tǒng)方法,一直未取得根本性進(jìn)步。近年來,醫(yī)學(xué)界把目標(biāo)轉(zhuǎn)向從天然植物中提取抗癌物質(zhì),并逐漸成為腫瘤治療領(lǐng)域的一大熱點。
　　 β-苦瓜素(β-momorcharin)提取自苦瓜,其本質(zhì)為一種核糖體失活蛋白(RIP),通過修飾核糖體大亞基rRNA從而抑制蛋白質(zhì)生物合成,還具有破壞DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的活性功能,從而參與調(diào)節(jié)免疫機能。
　　 本課題研究

2、從植物中提取β-苦瓜素,測定其蛋白序列和相關(guān)蛋白特性。再應(yīng)用生物信息學(xué)軟件和在線生物信息學(xué)網(wǎng)站全面分析β-苦瓜素的蛋白序列,模建β-苦瓜素的二級結(jié)構(gòu),分析預(yù)測各類限制性表位和可能的功能結(jié)合位點,為β-苦瓜素的臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。
　　 研究內(nèi)容分為兩部分:
　　 第一部分為分離提取β-苦瓜素并測序及其蛋白質(zhì)性質(zhì)分析。
　　 1.分離提取β-苦瓜素:通過生理鹽水浸提、丙酮分級沉淀、CM-Sepharose離

3、子交換柱層析、Sephadex G-100凝膠過濾層析等一系列方法,經(jīng)透析、濃縮、凍干得到均一成分的β-苦瓜素。
　　 2.蛋白質(zhì)序列測定:通過酸水解、堿水解和上機測序等方法,測出β-苦瓜素完整序列。
　　 3.蛋白質(zhì)性質(zhì)測定:SDS-PAGE法測定出β-苦瓜素分子量,硫酸-酚法測定其含糖量,IEF法測定等電點。
　　 第二部分應(yīng)用生物信息學(xué)的方法進(jìn)行β-苦瓜素的結(jié)構(gòu)分析與表位預(yù)測
　　 使用DNASta

4、r Lasergene7、SwissPdbViewer等軟件和相關(guān)在線服務(wù)器模建β-苦瓜素的二級結(jié)構(gòu),預(yù)測β-苦瓜素蛋白序列的信號肽、B細(xì)胞表位、CTL表位、HLA限制性CTL表位結(jié)合力和MHC-Ⅰ、Ⅱ類分子結(jié)合肽。
　　 結(jié)果表明:β-苦瓜素蛋白分子量為32085.2,含糖量為1.3％,等電點為9.1,β-苦瓜素啟始部有段23個氨基酸構(gòu)成的信號肽,分布著6個B細(xì)胞表位,3個CTL表位,序列71-79的HLA限制性CTL表位結(jié)合