茶樹脫水素基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)差異分析.pdf

1、茶樹作為我國重要的經(jīng)濟(jì)作物，低溫引起的傷害一直是我國茶葉優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的限制因素。因此，研究與了解茶樹低溫脅迫下的抗逆機(jī)制，有針對(duì)性地發(fā)掘相關(guān)抗逆基因并加以利用，是近年來茶樹栽培育種研究領(lǐng)域中的一個(gè)熱點(diǎn)。本文對(duì)茶樹脫水素CsDHN1和CsDHN2基因DNA序列和它們的啟動(dòng)子進(jìn)行克隆和相關(guān)的序列分析，并研究了茶樹脫水素在不同組織器官、不同季節(jié)和越冬期間的差異性表達(dá)，為了解脫水素參與茶樹抗逆響應(yīng)及其調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。論文取得以下主要結(jié)果：

2、　　1）茶樹脫水素CsDHN1和CsDHN2基因DNA全長(zhǎng)被成功地克隆，經(jīng)測(cè)序分別得到長(zhǎng)1910bp和1821bp的DNA全長(zhǎng)序列。CsDHN1基因含有1個(gè)內(nèi)含子和2個(gè)外顯子，CsDHN2基因含有2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子，它們所有外顯子/內(nèi)含子交接點(diǎn)都遵從gt/ag剪接規(guī)則。
　　2)使用Genome Walker方法，分別擴(kuò)增出1048bp的CsDHN1基因啟動(dòng)子的序列和589bp的CsDHN2基因啟動(dòng)子的序列，符合真核生物啟動(dòng)子

3、的相關(guān)特征。
　　3）確定了一種茶樹脫水素Western blot檢測(cè)的蛋白提取方法。該方法是最適合茶樹葉片脫水素蛋白Western blot檢測(cè)的樣品制備方法，得到的Western blot圖譜信息量大，背景少，重復(fù)性好，且得率和效率高。
　　4）利用Western Blot技術(shù)，在茶樹不同組織器官中共發(fā)現(xiàn)14~86kDa10種不同分子量的脫水素，其表達(dá)具有較大的差異性。分子量為14kDa、23kDa、34kDa等3個(gè)脫水

4、素僅在種子蛋白中有大量檢出，可以初步判定它們是種子的特異性表達(dá)脫水素，可能與脫水相關(guān)。分子量21kDa、50kDa、58kDa、68kDa脫水素在芽、嫩葉和成熟葉片中表達(dá)量較高，而分子量為86kDa的脫水素在成熟葉片中無表達(dá)，可能與發(fā)育相關(guān)。
　　5）利用Western Blot技術(shù)，在不同季節(jié)茶樹成熟葉片內(nèi)共檢出分子量為21~68kDa7種不同分子量的脫水素，它們的表達(dá)具有季節(jié)差異性及品種差異性。分子量為21kDa、28kDa、

5、68kDa的脫水素在冬、春季表達(dá)較高，可能與低溫有關(guān)。皖茶91品種比烏牛早多表達(dá)一條分子量為40kDa的脫水素。
　　6）利用Western Blot技術(shù)，在越冬期茶樹成熟葉片內(nèi)共檢出分子量為21~68kDa的6種不同分子量的脫水素。它們的表達(dá)隨著溫度的變化具有先升后降的規(guī)律性，在11月或12月份蛋白表達(dá)量達(dá)到最高。分子量為21kDa、28kDa、40kDa脫水素在越冬期間表達(dá)水平較高。68kDa脫水素11月份之后才能檢測(cè)到，50