戊型肝炎病毒感染ZCLA長爪沙鼠的實驗研究.pdf

1、戊型肝炎(HepatitisE)是由戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus，HEV）引起的急性病毒性肝炎，主要通過糞口途徑傳播，常因飲用水源被污染導致暴發(fā)流行，散發(fā)病例呈全球性分布。自從學者Meng第一次報道從豬體內分離到HEV以后，許多學者進行了動物感染HEV的調查和實驗感染研究，越來越多的證據(jù)提示HEV是一種人獸共患病病毒，許多動物對HEV表現(xiàn)為易感，對于缺乏穩(wěn)定有效的HEV細胞培養(yǎng)體系的現(xiàn)狀，這一發(fā)現(xiàn)對于HEV的深入研究提供

2、重大突破。但是，具體的動物感染實驗結果表明，僅有非人靈長類動物感染HEV效果比較好，其它動物感染效果不佳。由于非人靈長類動物的價格高、難飼養(yǎng)和數(shù)量有限等原因又限制了其應用。選擇一個既感染效果好又經(jīng)濟適用的HEV小動物感染對象用于HEV的實驗研究很有必要，為此，本實驗選用ZCLA長爪沙鼠作為HEV感染對象，開展以下研究并獲取如下成果：
　　 第一部分糞便的采集和鑒定
　　 收集臨床確診為戊型肝炎的患者糞便6份，采用RT-n

3、PCR法獲得擴增片段并連接至載體PMD-19T后進行克隆測序鑒定，含HEV陽性的標本保存待用。結果本實驗從6份標本中獲取1份HEV陽性糞便，此糞便保存待用。
　　 第二部分熒光定量PCR檢測HEV方法的建立
　　 根據(jù)GenBank中提交的HEV全序列分析選取HEVORF2保守區(qū)域作為目的擴增序列，設計引物和Taqman探針，建立熒光定量PCR檢測HEV的方法，并檢測其靈敏度和穩(wěn)定性。實驗結果表明，本實驗建立的熒光定量P

4、CR檢測HEV的方法，最高檢測靈敏度為5copies，在5×10'copies～5copoies標準品質粒范圍內，標準曲線內的8個點具有良好的線性關系，相關系數(shù)R2值達0.998。組內重復性檢測顯示其變異系數(shù)(CV)范圍在0.02％～1.40％之間，組間重復性檢測顯示其變異系數(shù)(CV)范圍在0.87％～2.24％之間，具有良好的穩(wěn)定性和重復性。
　　 第三部分戊型肝炎病毒感染ZCLA長爪沙鼠的實驗
　　 用做毒株的糞便經(jīng)

5、PBS混勻制成10％的糞懸液后分別經(jīng)直徑0.45μm和0.22μm過濾膜除菌，腹腔接種ZCLA長爪沙鼠100μl/只，對照組接種PBS100μl/只，ZCLA長爪沙鼠預先腹腔接種青霉素6萬U/只，單只分籠養(yǎng)殖，按時喂養(yǎng)ZCLA長爪沙鼠并觀察記錄，每天收集糞便放于-70℃保存待檢。熒光定量PCR測定毒株糞便和收集糞便的HEV滴度。實驗結果表明，毒株糞便HEV滴度為4.1×103copies/g，實驗組ZCLA長爪沙鼠最早于接種后第6天糞便