南京市戊型肝炎病毒感染的現況調查.pdf

1、戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是一種新現病原微生物，最近才被國際病毒命名委員會(ICTV)歸入肝炎病毒科肝炎病毒屬。在發(fā)展中國家，尤其是在熱帶和亞熱帶，HEV是引起急性肝炎暴發(fā)流行的主要原因，并且大多是由于飲用被污染的水源所致。人群在感染HEV的同時還可以與其他肝炎病毒發(fā)生合并或重疊感染，其中，在慢性HBV感染基礎上重疊感染HEV，病情多加重，恢復緩慢，預后較差。孕婦感染HEV后病情表現更為嚴重，病死率可高達

2、20﹪。因此由HEV引起的戊型肝炎(HE)是一種嚴重危害人類健康的傳染性疾病。 目前尚無HEV疫苗可對人群進行預防接種，對人群總體HEV感染率也缺乏明確的認識，因此，了解全國及各個地區(qū)的HEV感染特征對研制和使用HEV疫苗進而達到預防和控制HEV感染就顯得十分重要和迫切。臨床上診斷HEV感染主要依靠免疫學方法檢測HEV抗體，由于抗原抗體反應存在特異性，一種檢測試劑質量的高低，關鍵取決于抗原的選擇。劉崇柏等曾于1992年對我國

3、13個省、市、自治區(qū)進行過人群HEV流行率的調查，但由于當時采用的GenelabsEIA診斷試劑現已被證實存在較大缺陷，所以結果的準確性受到影響，因此有必要采用新一代的HEV檢測試劑重新開展調查。本實驗室的盧晶等經過研究和與現有市售試劑比較，證實以HEV不同基因型和亞型p166混合抗原制備的HE免疫診斷試劑具有敏感性高、特異性強、適用面廣等特點，是一種可靠的HEV抗體檢測試劑。 以往的研究表明南方抗-HEV流行率高于北方，其

4、中一個重要原因是，HEV可以通過水源傳播。南京市地處長江流域，有豐富的水網分布，人口密集，具備HEV流行的基本條件，而且至今尚無HEV感染狀況的報道，因此有必要對南京市人群抗-HEV陽性率做一次大范圍的篩查，以期把握HEV的流行狀況和流行趨勢，為南京市HE的群策群防工作提供事實依據。 此外，由于HEV是RNA病毒，核酸復制缺乏校正系統(tǒng)，易于發(fā)生變異，基因型特別是基因亞型隨著時間的推移會出現新的變化，故存在基因型或基因亞型的多

5、樣性，而明確HEV的基因型或亞型對于HE的診斷、預防及流行病學特征具有重要意義。眾所周知，運用全基因序列進行基因分型應是分型的金標準，因為它涵蓋所有的遺傳信息，但是實際操作起來費時費力，可行性不高，所以我們迫切需要選擇一段能夠代表全基因信息的基因片段來用于HEV基因分型。世界各地的實驗室對HEV的基因分型提出了各自不同的區(qū)段，總數共達25個之多，其中ORF2 5’末端(nt5994-6294)，ORF15’末端(nt104-390)，O

6、RF23’末端(nt6701-7018)最為常用。本實驗室的翟理杰等通過生物統(tǒng)計學分析，認為位于OKF13末端(nt4254-4560，MJ-C)能夠替代I_tEV基因組全序列進行基因分型，并建立了新的}tEV基因分型標準?；谠撉捌诠ぷ鳎覀冞\用此區(qū)段來進行南京市HEV基因型的鑒定。因此，本研究實驗內容可分為以下兩個部分： 1、南京市人群戊型肝炎病毒感染的血清學調查 2005年3-7月在南京市醫(yī)院收集14020份血

7、清標本，利用本室制備的多基因型混合抗原進行HEVIgG抗體檢測，同時進行個案調查以收集相關流行病學資料。調查結果顯示抗-HEVIgG陽性率為18.30﹪。男，女抗-HEVIgG陽性率分別為19.57﹪和16.84﹪，經標化后男性極顯著高于女性(P<0.01)，并且感染率隨著年齡增加而有逐漸上升的趨勢。江寧區(qū)(21.94﹪)、浦口區(qū)(20.59﹪)人群感染率顯著高于鼓樓(17.40﹪)、玄武(16.42﹪)、秦淮(17.90﹪)、下關(1

8、8.61﹪)、白下(18.50﹪)等五區(qū)(P<0.05)。具有大學文化程度者(10.54﹪)極顯著低于小學(22.47﹪)和中學(22.55﹪)文化程度者(P0.05)，而外來務工人員(23.95﹪)感染率則較高(P<0.05)。 2、南京市戊型肝炎病毒基因型的鑒定 我們采用位于0RFl 3’末端(nt

9、4254-4560)的片段替代HEV全基因組序列進行基因分型。我們先從GenBank中提取 49 個全基因序列，應用DNAstars生物學軟件對這些全基因序列進行alignment分析，根據此片段(MJ-C)兩側的保守序列，設計了兩組引物(MJI-11，MJI-12)，并就優(yōu)化PCR反應體系做了摸索和探討，通過 3 因素(dNTP、MgCl2、退火溫度) 8 種不同水平的組合，結果顯示：引物組合MJHl較MJH2好；采用同一條件擴增不同

10、基因型HEV，dNllP、MgCl<,2>分別為1mmol/L、1.5 mmol/L退火溫度為50℃時，為 3 種因素的最適組合。繼后我們利用逆轉錄套式PCR(RT-nPCR)方法檢測南京地區(qū)HEV IgM抗體陽性的急性HE患者標本，包括30份血清標本和10份糞便標本。將所獲得的 PCR 陽性產物進行測序。采用分子生物學軟件LASERGENE和PHYIIP軟件包進行序列的同源性比較、遺傳距離計算以及基因進化樹的繪制，利用生物信息學軟件比

11、較核苷酸的同源性、遺傳距離，進行基因型和基因亞型的鑒定。結果表明：在獲得的17株序列中，無一例外的屬于HEV基因Ⅳ型，但鑒定出一株新的基因亞型的毒株(C11)，提示南京市存在的HEV毒株正在發(fā)生變異。 綜上所述，通過此次南京市正常人群 HEV 感染率的調查，我們發(fā)現：HEV 感染率的高低受居住環(huán)境，文化程度以及職業(yè)等多種因素的影響，HE 的預防要采用包括疫苗在內的多種綜合措施。南京地區(qū)HEV毒株歸屬為Ⅳ型，但出現了新的基因亞