南京市戊型肝炎病毒感染的現(xiàn)況調(diào)查.pdf

1、戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是一種新現(xiàn)病原微生物，最近才被國(guó)際病毒命名委員會(huì)(ICTV)歸入肝炎病毒科肝炎病毒屬。在發(fā)展中國(guó)家，尤其是在熱帶和亞熱帶，HEV是引起急性肝炎暴發(fā)流行的主要原因，并且大多是由于飲用被污染的水源所致。人群在感染HEV的同時(shí)還可以與其他肝炎病毒發(fā)生合并或重疊感染，其中，在慢性HBV感染基礎(chǔ)上重疊感染HEV，病情多加重，恢復(fù)緩慢，預(yù)后較差。孕婦感染HEV后病情表現(xiàn)更為嚴(yán)重，病死率可高達(dá)

2、20﹪。因此由HEV引起的戊型肝炎(HE)是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病。 目前尚無(wú)HEV疫苗可對(duì)人群進(jìn)行預(yù)防接種，對(duì)人群總體HEV感染率也缺乏明確的認(rèn)識(shí)，因此，了解全國(guó)及各個(gè)地區(qū)的HEV感染特征對(duì)研制和使用HEV疫苗進(jìn)而達(dá)到預(yù)防和控制HEV感染就顯得十分重要和迫切。臨床上診斷HEV感染主要依靠免疫學(xué)方法檢測(cè)HEV抗體，由于抗原抗體反應(yīng)存在特異性，一種檢測(cè)試劑質(zhì)量的高低，關(guān)鍵取決于抗原的選擇。劉崇柏等曾于1992年對(duì)我國(guó)

3、13個(gè)省、市、自治區(qū)進(jìn)行過(guò)人群HEV流行率的調(diào)查，但由于當(dāng)時(shí)采用的GenelabsEIA診斷試劑現(xiàn)已被證實(shí)存在較大缺陷，所以結(jié)果的準(zhǔn)確性受到影響，因此有必要采用新一代的HEV檢測(cè)試劑重新開(kāi)展調(diào)查。本實(shí)驗(yàn)室的盧晶等經(jīng)過(guò)研究和與現(xiàn)有市售試劑比較，證實(shí)以HEV不同基因型和亞型p166混合抗原制備的HE免疫診斷試劑具有敏感性高、特異性強(qiáng)、適用面廣等特點(diǎn)，是一種可靠的HEV抗體檢測(cè)試劑。 以往的研究表明南方抗-HEV流行率高于北方，其

4、中一個(gè)重要原因是，HEV可以通過(guò)水源傳播。南京市地處長(zhǎng)江流域，有豐富的水網(wǎng)分布，人口密集，具備HEV流行的基本條件，而且至今尚無(wú)HEV感染狀況的報(bào)道，因此有必要對(duì)南京市人群抗-HEV陽(yáng)性率做一次大范圍的篩查，以期把握HEV的流行狀況和流行趨勢(shì)，為南京市HE的群策群防工作提供事實(shí)依據(jù)。 此外，由于HEV是RNA病毒，核酸復(fù)制缺乏校正系統(tǒng)，易于發(fā)生變異，基因型特別是基因亞型隨著時(shí)間的推移會(huì)出現(xiàn)新的變化，故存在基因型或基因亞型的多

5、樣性，而明確HEV的基因型或亞型對(duì)于HE的診斷、預(yù)防及流行病學(xué)特征具有重要意義。眾所周知，運(yùn)用全基因序列進(jìn)行基因分型應(yīng)是分型的金標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)樗w所有的遺傳信息，但是實(shí)際操作起來(lái)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，可行性不高，所以我們迫切需要選擇一段能夠代表全基因信息的基因片段來(lái)用于HEV基因分型。世界各地的實(shí)驗(yàn)室對(duì)HEV的基因分型提出了各自不同的區(qū)段，總數(shù)共達(dá)25個(gè)之多，其中ORF2 5’末端(nt5994-6294)，ORF15’末端(nt104-390)，O

6、RF23’末端(nt6701-7018)最為常用。本實(shí)驗(yàn)室的翟理杰等通過(guò)生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，認(rèn)為位于OKF13末端(nt4254-4560，MJ-C)能夠替代I_tEV基因組全序列進(jìn)行基因分型，并建立了新的}tEV基因分型標(biāo)準(zhǔn)?；谠撉捌诠ぷ?，我們運(yùn)用此區(qū)段來(lái)進(jìn)行南京市HEV基因型的鑒定。因此，本研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容可分為以下兩個(gè)部分： 1、南京市人群戊型肝炎病毒感染的血清學(xué)調(diào)查 2005年3-7月在南京市醫(yī)院收集14020份血

7、清標(biāo)本，利用本室制備的多基因型混合抗原進(jìn)行HEVIgG抗體檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行個(gè)案調(diào)查以收集相關(guān)流行病學(xué)資料。調(diào)查結(jié)果顯示抗-HEVIgG陽(yáng)性率為18.30﹪。男，女抗-HEVIgG陽(yáng)性率分別為19.57﹪和16.84﹪，經(jīng)標(biāo)化后男性極顯著高于女性(P<0.01)，并且感染率隨著年齡增加而有逐漸上升的趨勢(shì)。江寧區(qū)(21.94﹪)、浦口區(qū)(20.59﹪)人群感染率顯著高于鼓樓(17.40﹪)、玄武(16.42﹪)、秦淮(17.90﹪)、下關(guān)(1

8、8.61﹪)、白下(18.50﹪)等五區(qū)(P<0.05)。具有大學(xué)文化程度者(10.54﹪)極顯著低于小學(xué)(22.47﹪)和中學(xué)(22.55﹪)文化程度者(P0.05)，而外來(lái)務(wù)工人員(23.95﹪)感染率則較高(P<0.05)。 2、南京市戊型肝炎病毒基因型的鑒定 我們采用位于0RFl 3’末端(nt

9、4254-4560)的片段替代HEV全基因組序列進(jìn)行基因分型。我們先從GenBank中提取 49 個(gè)全基因序列，應(yīng)用DNAstars生物學(xué)軟件對(duì)這些全基因序列進(jìn)行alignment分析，根據(jù)此片段(MJ-C)兩側(cè)的保守序列，設(shè)計(jì)了兩組引物(MJI-11，MJI-12)，并就優(yōu)化PCR反應(yīng)體系做了摸索和探討，通過(guò) 3 因素(dNTP、MgCl2、退火溫度) 8 種不同水平的組合，結(jié)果顯示：引物組合MJHl較MJH2好；采用同一條件擴(kuò)增不同

10、基因型HEV，dNllP、MgCl<,2>分別為1mmol/L、1.5 mmol/L退火溫度為50℃時(shí)，為 3 種因素的最適組合。繼后我們利用逆轉(zhuǎn)錄套式PCR(RT-nPCR)方法檢測(cè)南京地區(qū)HEV IgM抗體陽(yáng)性的急性HE患者標(biāo)本，包括30份血清標(biāo)本和10份糞便標(biāo)本。將所獲得的 PCR 陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。采用分子生物學(xué)軟件LASERGENE和PHYIIP軟件包進(jìn)行序列的同源性比較、遺傳距離計(jì)算以及基因進(jìn)化樹(shù)的繪制，利用生物信息學(xué)軟件比

11、較核苷酸的同源性、遺傳距離，進(jìn)行基因型和基因亞型的鑒定。結(jié)果表明：在獲得的17株序列中，無(wú)一例外的屬于HEV基因Ⅳ型，但鑒定出一株新的基因亞型的毒株(C11)，提示南京市存在的HEV毒株正在發(fā)生變異。 綜上所述，通過(guò)此次南京市正常人群 HEV 感染率的調(diào)查，我們發(fā)現(xiàn)：HEV 感染率的高低受居住環(huán)境，文化程度以及職業(yè)等多種因素的影響，HE 的預(yù)防要采用包括疫苗在內(nèi)的多種綜合措施。南京地區(qū)HEV毒株歸屬為Ⅳ型，但出現(xiàn)了新的基因亞