病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷

1、病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷,張德純 教授臨床微生物教研室,病毒（Virus）是結(jié)構(gòu)最簡單、體積最小的微生物。病毒感染十分常見，約70%~80%的傳染病由病毒感染所引起。迄今已證實(shí)500多種病毒對(duì)人有致病性，其中不少病毒危害極大，如最近流行的SARS病毒。因此盡快獲得病毒的實(shí)驗(yàn)診斷，對(duì)控制病毒的傳播、疾病的診斷和防治具有重要的意義。,病毒性疾病實(shí)驗(yàn)診斷的一般原則：特異、敏感、快速和簡便。首先根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)，初步判斷可能感染的病毒；然

2、后根據(jù)可疑病毒生物學(xué)特點(diǎn)、機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過程，以及病人當(dāng)前所處的時(shí)機(jī)，確定實(shí)驗(yàn)診斷的方法。目前病毒感染的檢查主要依靠經(jīng)典的方法和近來發(fā)展起來的分子生物學(xué)等方法。前者主要包括病毒分離培養(yǎng)、鑒定及血清學(xué)實(shí)驗(yàn)；后者主要是核酸雜交與PCR及現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)。,,病毒學(xué)檢驗(yàn),,病毒分離培養(yǎng) 病原學(xué)診斷 形態(tài)學(xué)檢測 分子生物學(xué)技術(shù)——病毒核酸

3、 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 中和試驗(yàn)血清學(xué)診斷 血凝抑制試驗(yàn) 間接免疫熒光檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),,,,一、標(biāo)本采集與運(yùn)送（一）標(biāo)本的采集 要從臨床標(biāo)本中成功地分離出病毒，很大程度上取決于標(biāo)本的恰當(dāng)采樣和處理，為了保證標(biāo)本質(zhì)量，應(yīng)注意以下問題： 1．

4、采樣時(shí)間 盡可能在發(fā)病的初期，急性期或患者入院的當(dāng)天進(jìn)行，越早越好，最好在治療之前。疾病后期體內(nèi)產(chǎn)生免疫力，病毒量減少或消失。,,2．標(biāo)本種類的選擇 根據(jù)臨床感染的癥狀及流行病學(xué)資料，判斷可能感染病毒的種類，選擇相應(yīng)部位采取標(biāo)本，處理標(biāo)本時(shí)要考慮病毒的生物學(xué)特性。常見分離病毒標(biāo)本的選擇見教材P64表4-2。（1）    心臟疾?。?）  &#

5、160; 中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（3）    先天或新生兒感染（4）    胃腸道疾病（5）    呼吸道感染,,3．常見標(biāo)本的采集方法（1） 血液：以無菌手續(xù)抽取抗凝血10ml， 抗凝劑可選用100u/ml肝素鈉。為了血清學(xué)檢查的需要，應(yīng)抽取另一管5ml血液，不抗凝送檢。 （2） 腦脊液：以無菌手續(xù)抽取腦

6、脊液1~2ml，置無菌試管內(nèi)，在冰浴中立 即送檢。4℃可存放72h。,,（3）宮頸或陰道拭子 采取病灶部位分泌物，將拭子置運(yùn)送液中；如無病損部位，則清理宮頸口粘液，將拭子伸入宮頸約1cm停留5秒以上取出，置運(yùn)送液中4℃冰浴立即送檢。,,（4） 糞便標(biāo)本 取2~4g糞便標(biāo)本在無菌的容器中，加8~10ml運(yùn)送液立即送檢。（5） 含漱液 可用無菌生理鹽水，讓患者含

7、漱幾次取得，與運(yùn)送液等量混合。,,（6） 喉拭子：用生理鹽水濕潤的拭子采 取咽喉部表面，置運(yùn)送液中，注意 避免唾液污染。（7）尿道拭子及尿液標(biāo)本：尿道拭子伸 入尿道4cm輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)2~3次，以獲 得較多的上皮細(xì)胞，取出后置運(yùn)送 液中。（8）尸檢標(biāo)本：應(yīng)在死亡后盡早采取， 采集各

8、種器官時(shí)要分開使用器械和 容器。,（二）標(biāo)本的運(yùn)送和保存 標(biāo)本采集后注意無菌、冷凍、保濕、立即送檢。 分離培養(yǎng)病毒的標(biāo)本要盡快送到實(shí)驗(yàn)室處理和接種。如不能及時(shí)送檢，可在4℃冷藏?cái)?shù)小時(shí)，如需較長時(shí)間保存則應(yīng)置-70℃。放置在-20℃，病毒容易滅活，凍存液中需加入甘油或二甲亞砜等作保護(hù)，避免反復(fù)凍融使病毒滅活。,為了抑制細(xì)菌生長通常在病毒傳送培養(yǎng)基（VTM）中加入抗生素如青霉

9、素100U/l和鏈霉素100μg/ml，為了抑制真菌的生長加入2.5μg/ml二性霉素B或40μg/ml制霉菌素。,,二、病毒的分離與鑒定（一）病毒分離和鑒定的一般程序 見書P66圖4-1（二）病毒的分離 病毒是專性細(xì)胞寄生，需要在活細(xì)胞或動(dòng)物體內(nèi)才能得到分離。選擇何種動(dòng)物或細(xì)胞來分離，應(yīng)根據(jù)臨床感染的癥狀和流行病學(xué)資料，推測可能的病毒種類，選擇相對(duì)

10、敏感的動(dòng)物和細(xì)胞來分離標(biāo)本中的病毒。,1.組織培養(yǎng)（1）  概念 將人或動(dòng)物離體的活組織或分散的活細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)室的試管或培養(yǎng)基中，模擬體內(nèi)的生理?xiàng)l件使之生存和生長，稱之為組織培養(yǎng)。（2）  組織培養(yǎng)的類型 A 器官培養(yǎng)：如氣管、腸段。器官保存了原功 能，用于分離某些有器官特異性的病毒。 B 組織塊培養(yǎng)：如肝組織塊培養(yǎng)肝炎病毒。 C

11、 細(xì)胞培養(yǎng)（單層細(xì)胞培養(yǎng)）：現(xiàn)廣泛使用的 組織培養(yǎng)技術(shù)。,（3）細(xì)胞培養(yǎng)的種類和方法 根據(jù)細(xì)胞的來源、染色體特性和傳代次數(shù)的不同可分為三類： 1．  原代和次代細(xì)胞培養(yǎng) 離體的新鮮組織或器官，機(jī)械處理 胰蛋白 洗滌

12、 吹打酶消化 加入營養(yǎng)液 單個(gè)細(xì)胞懸液 1-3次 細(xì)胞計(jì)數(shù) 、調(diào)整細(xì)胞濃度 分裝在培養(yǎng) 生長 瓶內(nèi)培養(yǎng) 形成單層細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),,,,,,,,胰酶消化 轉(zhuǎn)種新的培養(yǎng)瓶

13、 形成單層 細(xì)胞，稱為次代細(xì)胞培養(yǎng)  2．  二倍體細(xì)胞株 原代細(xì)胞多次連續(xù)傳代后仍保持二倍體染色體特性（即含23對(duì)染色體），稱之為二倍體細(xì)胞。傳代細(xì)胞壽命一般為40~50代，大多數(shù)為成纖維細(xì)胞,如人胚肺細(xì)胞。廣泛用于病毒分離和疫苗制備。,,,3．傳代細(xì)胞系 來源于腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞株傳代過程的變異細(xì)胞。細(xì)胞增殖特

14、征和染色體均類似于腫瘤細(xì)胞。不宜用于疫苗的制備，常用于病毒的分離和鑒定。 （4）組織培養(yǎng)的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：A．來源廣；B．不受機(jī)體免疫因素影響，個(gè)體差異小，敏感范圍廣；C．易于觀察病變；D．可用于病毒的分離、鑒定、疫苗的制備；E．易管理，相對(duì)比較經(jīng)濟(jì)。 缺點(diǎn)：條件要求高，必須要有細(xì)胞培養(yǎng)的條件。,2. 雞胚接種 雞胚是用于分離粘病毒科、皰疹病毒、痘類病毒的較為理想的材料。

15、  （1） 常用接種部位和用途 38-39℃ 新鮮受精卵 5-13天,,,卵黃囊接種羊水腔接種 尿囊腔接種 絨毛尿囊膜接種,卵殼,,氣室,,,尿囊,,絨毛尿囊膜,,卵黃囊,,卵白,,羊膜,,羊水囊,①  卵黃囊接種：用于流行性腦炎病毒分

16、 離 ② 羊水腔接種：用于流感病毒、副流感 病毒的初次分離 ③ 尿囊腔接種：用于流感病毒、腺病毒、 腮腺炎病毒分離 ④ 絨毛尿囊膜接種：用于痘病毒、皰疹 病毒分離,（2）    雞胚接種的特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：A.雞胚是一個(gè)整體，可有多種 接種途徑；

17、 B.可收獲大量病毒； C.雞胚本是無菌無病毒的，對(duì) 接種病毒不產(chǎn)生抗體； D.來源廣，操作簡便。 缺點(diǎn): A.易感病毒較少，應(yīng)用較局限； B.反復(fù)用雞胚傳代，病毒毒力 可下降。,3. 動(dòng)物接種,（1） 

18、;常用動(dòng)物：小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、 猴等（2） 接種途徑： 呼吸道病毒，如流感病毒，滴鼻接種3周齡新生小鼠腸道病毒，如柯薩奇病毒，腹腔接種乳鼠（一日齡）乙肝病毒，靜脈注射猩猩嗜神經(jīng)病毒，如乙腦病毒（用3周齡小鼠）、狂犬病毒（用家兔），顱內(nèi)接種,,（3） 接種后觀察應(yīng)每日至少兩次，必要時(shí) 每隔2~4小時(shí)觀察一次。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)?的的不同，觀察不同的反應(yīng)情

19、況。（4） 動(dòng)物接種特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：A.可以按照不同途徑分離鑒定 病毒，可模擬人類感染途徑 B.可用于疫苗的篩選、制備 C.可用于制備抗血清 D.操作簡便，對(duì)環(huán)境要求低,,缺點(diǎn)：A.可自然帶毒或隱性感染，影響 結(jié)果的觀察

20、B.存在個(gè)體差異 C.敏感病毒較少，或有些病毒感 染后不出現(xiàn)明顯癥狀，不宜觀 察 D.不經(jīng)濟(jì)，難管理,（三）病毒的鑒定 1.初步鑒定 根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)特點(diǎn)、標(biāo)本來源、易感動(dòng)物范圍、細(xì)胞病變特征及生物學(xué)特性、理化性質(zhì)，可初步確定病毒屬于何科何屬。（1）  動(dòng)物感染范圍及潛伏期

21、 病毒感染動(dòng)物的范圍、發(fā)病的潛伏期有差異。如柯薩奇B組病毒對(duì)新生乳鼠致病，對(duì)成年小鼠不致??；小鼠腦內(nèi)接種乙腦病毒，潛伏期一般為4天，少于4天發(fā)病則可能為非乙腦病毒引起。,（2）對(duì)雞胚的敏感性 不同病毒對(duì)雞胚不同接種途徑敏感性不同。 直接法：如觀察絨毛尿囊膜是否有病灶 間接法：尿囊液、羊水做血凝抑制試驗(yàn)等,（3）  病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中的表現(xiàn),① 細(xì)胞代謝類型改變：細(xì)胞代謝產(chǎn)酸可

22、 導(dǎo)致培養(yǎng)液pH指示劑呈黃色，病毒 增殖抑制了細(xì)胞代謝，使培養(yǎng)液不變 色或變紅。但腺病毒不抑制細(xì)胞代謝， 反而促進(jìn)糖酵解增加產(chǎn)酸。② 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 由病毒增殖所引起的細(xì)胞變化稱為 細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect CPE)。,,A. 細(xì)胞溶解，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)空斑, 如腸道病毒； B. 細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞，如

23、皰疹病 毒；C .細(xì)胞腫大，變圓堆積成葡萄狀，如腺 病毒；D .胞漿內(nèi)或核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體，如 狂犬病毒：E .不出現(xiàn)細(xì)胞病變現(xiàn)象。,③ 空斑或蝕斑（plaque）形成試驗(yàn) 空斑是指在單層細(xì)胞中被病毒感染引起死亡的細(xì)胞區(qū)域，周圍被活細(xì)胞包圍。一般而言，一個(gè)空斑是由一個(gè)感染性病毒顆粒感染所引起。不同的病毒引起的空斑形態(tài)和大小不同?？蛇M(jìn)行病毒顆粒的計(jì)數(shù)、純化，結(jié)合中

24、和試驗(yàn)可進(jìn)行病毒的鑒定。,④ 干擾現(xiàn)象 一種病毒感染細(xì)胞后，可以干擾以后進(jìn)入的病毒的增殖。利用此現(xiàn)象鑒定不引起形態(tài)學(xué)變化的病毒。如某些型別的鼻病毒能干擾以后進(jìn)入的副流感Ⅰ型病毒的增殖，從而阻抑后者的紅細(xì)胞吸附作用。,⑤ 紅細(xì)胞吸附及吸附抑制試驗(yàn) 紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象的產(chǎn)生是由于病毒在細(xì)胞膜成熟時(shí)，將其血凝素插入細(xì)胞膜，使感染細(xì)胞吸附紅細(xì)胞，是病毒增殖的指標(biāo)。該現(xiàn)象可被相應(yīng)的病毒特異性抗體所抑制，稱為

25、紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)，可用來鑒定病毒。,（4）  理化性質(zhì)的測定 ① 病毒的大小和形態(tài)：可用電鏡觀察病毒的大小和形態(tài)。 ②　核酸類型鑒別及序列測定：利用5-溴-2-脫氧尿苷（BUDR）抑制DNA復(fù)制的特性，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入該物質(zhì)，可抑制DNA病毒的復(fù)制和增殖，抑制細(xì)胞病變的出現(xiàn)，但對(duì)RNA病毒無抑制作用，以此判斷病毒核酸類型。也可對(duì)病毒特異序列或全序列的堿基排列測定或DNA雜交、DNA-RNA雜交來鑒定病毒。

26、,③ 耐酸試驗(yàn) 腸道病毒對(duì)酸有耐受力，而鼻病毒在酸性環(huán)境下易被滅活。 ④ 乙醚敏感試驗(yàn) 病毒外周如有類脂包膜，則易被乙醚破壞，而失去感染性，不能感染細(xì)胞。可作為病毒是否具有類脂包膜的依據(jù)，也可用氯仿或去膽酸鈉代替乙醚進(jìn)行試驗(yàn)。,2 最后鑒定——血清學(xué)試驗(yàn) 在初步鑒定的基礎(chǔ)上，對(duì)已分離出陽性結(jié)果需選擇適當(dāng)?shù)难鍖W(xué)方法對(duì)病毒分離株作最后鑒定。血清學(xué)方法鑒定是將分離到的病毒和已知

27、病毒的參考血清作中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等。由于分子病毒學(xué)的發(fā)展，病毒的最后鑒定還應(yīng)包括分子生物學(xué)方法的鑒定，它還能檢出不產(chǎn)生細(xì)胞病變的那些病毒。,（1） 中和試驗(yàn) 是將病毒與特異性抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，使病毒失去感染性，在細(xì)胞培養(yǎng)和活的機(jī)體內(nèi)不出現(xiàn)病變的試驗(yàn)。常用細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行中和試驗(yàn)。,方 法：①固定病毒（100TCID50），稀釋血清，測Ab效價(jià)。兩次效價(jià)相差4倍以上有診斷意義。 TCID50：50%組織細(xì)

28、胞感染的病毒劑量(50%Tissue cell infective dose TCID50)。 ②　固定血清（1：20或1：40），稀釋病毒，求中和指數(shù)。,中和指數(shù)>50為陽性，有意義； 中和指數(shù)<9為陰性，無意義； 中和指數(shù)10~49，為可凝。 中和試驗(yàn)較復(fù)雜和費(fèi)時(shí)，多用于V的鑒定和流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)臨床診斷價(jià)值不大。（2）血凝與血凝抑制試驗(yàn) 某些

29、病毒可與一定種類的哺乳動(dòng)物或禽類的紅細(xì)胞產(chǎn)生血凝現(xiàn)象。加入相應(yīng)的血凝素抗體可抑制血凝現(xiàn)象的發(fā)生，稱為血凝抑制試驗(yàn)。可作為病毒型別鑒定的依據(jù)。（3）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn),三、病毒感染的快速診斷（一）、病毒的形態(tài)學(xué)檢查1.    光學(xué)顯微鏡 可以觀察到大型的病毒如痘病毒類。在光學(xué)顯微鏡下還可以觀察到病毒感染的宿主細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性的包涵體（inclusion body）。根據(jù)

30、包涵體的特點(diǎn)，可以作出輔助診斷。包涵體可能是病毒增殖的場所或病毒顆粒的聚合體，也可能是宿主細(xì)胞對(duì)病毒作用的反應(yīng)產(chǎn)物，一般來說，產(chǎn)生核內(nèi)包涵體的是在細(xì)胞核內(nèi)裝配的病毒（通常為DNA病毒），產(chǎn)生胞質(zhì)內(nèi)包涵體的是在胞質(zhì)中裝配病毒（通常為RNA病毒）。,2.     電子顯微鏡檢查 （1）電鏡直接檢查：某些病毒感染的早期在臨床標(biāo)本中就可出現(xiàn)病毒顆粒。經(jīng)粗提濃縮后用磷鎢酸鹽負(fù)染，電鏡下直接觀察，可發(fā)現(xiàn)病

31、毒顆粒，獲得診斷。 （2）免疫電鏡檢查：在含病毒的標(biāo)本中，加入特異抗體。經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后，使標(biāo)本中的病毒顆粒聚集成塊，再經(jīng)負(fù)染觀察，比直接電鏡檢查更易發(fā)現(xiàn)病毒體，靈敏度可提高100倍。,（二）、病毒抗原檢查 病毒抗原是病毒特異性的標(biāo)志，通過免疫學(xué)技術(shù)檢測標(biāo)本中的特異性抗原存在，可以早期診斷病毒感染。用于病毒抗原檢查的抗體，最好是單克隆抗體。 1.   免疫熒光技術(shù)

32、 有直接和間接熒光法。具有快速、實(shí)用的優(yōu)點(diǎn)。適合于病毒型別少，細(xì)胞培養(yǎng)難以成功的病毒。間接熒光技術(shù)具有放大作用，因而靈敏度比直接法高。免疫熒光技術(shù)易出現(xiàn)非特異性熒光，導(dǎo)致假陽性，需要嚴(yán)格對(duì)照和排除試驗(yàn)。,2.   酶免疫技術(shù) 有酶免組化和酶免吸附試驗(yàn)法。酶免組化法與免疫熒光技術(shù)相同，不同的是將熒光標(biāo)記改為酶標(biāo)記。由于酶反應(yīng)的產(chǎn)物具有累積性，因而靈敏度比熒光技術(shù)高。 3.

33、 其它技術(shù) 如固相放射免疫技術(shù)、發(fā)光免疫分析技術(shù)、膠體金標(biāo)記的免疫層析技術(shù)等。,（四）、病毒核酸檢測,1.  斑點(diǎn)雜交法(dot blot hybridization)： 將待測的DNA或RNA直接點(diǎn)在雜交濾膜上,變性后,用標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。,（三）、早期抗體檢測 檢測病毒感染機(jī)體后產(chǎn)生的早期特異性抗體。,2.  

34、60; 固相雜交技術(shù) 將核酸探針進(jìn)行修飾后，包被強(qiáng)力吸附的聚苯乙烯微孔板中，加入待測的核酸序列和標(biāo)記的指示探針在微孔板的雜交液中，進(jìn)行雜交，洗滌后，用酶免疫技術(shù)進(jìn)行檢測?；?qū)⒑怂崽结槹挥谖⑿〈胖楸砻?，懸浮于雜交液中。與待測的核酸序列及標(biāo)記的指示探針進(jìn)行雜交。用磁分離技術(shù)分離結(jié)合有雜交體的磁體，進(jìn)行檢測。,3.原位分子雜交技術(shù)（in situ hybridization） 是核酸雜交技術(shù)結(jié)

35、合細(xì)胞學(xué)技術(shù)的一種特殊檢測技術(shù)。通過將細(xì)胞固定后，在不破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的前提下，在細(xì)胞原位釋放暴露DNA或RNA，加入標(biāo)記的特異核酸探針，進(jìn)行雜交。通過顯色技術(shù)，可以顯示特定的雜交探針在細(xì)胞內(nèi)的位置和核酸的數(shù)量。直接觀察待測核酸在細(xì)胞內(nèi)的分布狀態(tài)與細(xì)胞染色體的關(guān)系。,4. Southern印跡法和Northern印跡法： Southern印跡法用于DNA的雜交。將DNA提取后，直接或經(jīng)限制性內(nèi)切酶切割后，在瓊脂糖

36、電泳中使DNA按分子量大小分開，然后將瓊脂糖凝膠中的DNA移至硝酸纖維膜上，用標(biāo)記探針進(jìn)行雜交?？梢詸z測病毒DNA中的特異序列。 Northern印跡法用于RNA的雜交分析。利用RNA與DBM(diagobenloxymethyl)結(jié)合的特點(diǎn)，將瓊脂糖電泳后的RNA移至DBM膜上，用標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。RNA也可轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上進(jìn)行雜交分析。用于檢測RNA或mRNA。,5.聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase cha

37、in reaction PCR)： 選擇病毒的特異、保守片段作為靶基因，進(jìn)行引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增，可診斷病毒性感染。選擇病毒的易變區(qū)，結(jié)合RFLP，測序等技術(shù)可以對(duì)病毒進(jìn)行分析和突變的研究。 （1）  DNA病毒：可直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增其特異片段。,（2）  RNA病毒：可通過RT-PCR技術(shù)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，常結(jié)合巢式PCR(nest-PCR)技術(shù)進(jìn)行二次擴(kuò)增，

38、提高了反應(yīng)的靈敏度和特異性。（3）  定量PCR技術(shù)：PCR技術(shù)是以指數(shù)方式對(duì)靶基因進(jìn)行擴(kuò)增。采用內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行原始標(biāo)本定量，對(duì)病毒感染的診斷起到了量化的作用。同時(shí)，對(duì)研究病毒和機(jī)體之間的關(guān)系提供了參考。,6.   病毒核酸的直接檢測 有些病毒如輪狀病毒的核酸具有典型的分節(jié)段特點(diǎn)?？梢詮臉?biāo)本中直接提取輪狀病毒的核酸。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），觀察其特有的1

39、1個(gè)核酸節(jié)段的條帶排列情況，進(jìn)行診斷。,（五）、 病毒檢驗(yàn)的結(jié)果評(píng)價(jià) 通過實(shí)驗(yàn)手段，從標(biāo)本中獲得有關(guān)病毒感染的證據(jù)，從而確定病毒感染和臨床疾病之間的因果關(guān)系，是病毒實(shí)驗(yàn)診斷的目標(biāo)。感染病毒的臨床意義必須結(jié)合流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、病毒種類及機(jī)體的病理變化作綜合分析，才能判定。,對(duì)一些急性病毒性疾病，在疾病流行季節(jié)、臨床特征與病毒的致病特征相符時(shí)，可作病原學(xué)診斷，或結(jié)合患者急性期和恢復(fù)期血清中相應(yīng)的特異性抗體有4

40、倍以上的升高，也可得出病原學(xué)診斷。,對(duì)另一些病毒，則需考慮健康帶毒、隱性感染、混合感染和持續(xù)狀態(tài)感染。此時(shí)可尋求血清學(xué)特異性抗體水平是否升高的依據(jù)來幫助診斷。 臨床上疑為病毒感染，而分離培養(yǎng)陰性，在確認(rèn)標(biāo)本采集正確、無污染、并采用了敏感的細(xì)胞株，而且通過可靠的識(shí)別方法確認(rèn)無病毒存在，則可排除可疑病毒的可能性。如果可疑病毒為無法培養(yǎng)或難以分離的病毒，則不能排除感染的可能性，可采用其他的方法如血清學(xué)檢查特異性抗體以助

41、診斷。,IgM抗體的測定有助于早期診斷，但在感染的早期機(jī)體產(chǎn)生的IgM有明顯的個(gè)體差異。免疫抑制病人、局部感染、或由多種血清型病毒引起的感染，特異性IgM抗體檢查可能為陰性。此外，有少數(shù)病人產(chǎn)生的特異性IgM抗體可持續(xù)1~2年。在評(píng)價(jià)IgM抗體檢查的可靠性方面需引起注意。,分子生物學(xué)診斷是通過測定病毒核酸而實(shí)現(xiàn)的，利用Southern雜交可根據(jù)病毒核酸分子量的大小觀察整合型和游離型病毒。PCR方法有極高的靈敏度，但仍然有假陽性。另外，檢