Ac-SDKP活化cAMP-Epac信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)AngII介導(dǎo)的矽肺肌成纖維細(xì)胞分化的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：研究 N-乙酰基-絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）經(jīng)由 Epac信號(hào)對(duì)矽肺大鼠肌成纖維細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用，以及對(duì)血管緊張素（Ang）II誘導(dǎo)的人胚肺MRC-5成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的抑制機(jī)制。
　　方法：構(gòu)建矽肺大鼠模型，并予以Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療，HE和Masson染色法觀察病理形態(tài)，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)，western blot法檢測(cè) I型膠

2、原、血清反應(yīng)因子（SRF）、β2腎上腺素受體（ADRB2）和cAMP直接激活的交換蛋白（Epac）1蛋白的表達(dá)。采用 Ang II誘導(dǎo)MRC-5成纖維細(xì)胞并予以Ac-SDKP或8-Me-cAMP預(yù)處理，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察α-SMA、SRF的表達(dá)與定位，western blot法檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì) I型膠原、α-SMA、SRF及其轉(zhuǎn)錄輔因子（MRTF）-A、Epac1和Epac2的表達(dá)。用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為

3、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：在矽肺模型組中，出現(xiàn)明顯矽結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)內(nèi)可見α-SMA標(biāo)記的肌成纖維細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)，western blot法檢測(cè)矽肺組織中 I型膠原、α-SMA、SRF表達(dá)上調(diào)，而 ADRB2和Epac1蛋白表達(dá)下調(diào)，給予 Ac-SDKP抗纖維化治療或預(yù)防治療能夠抑制該變化。Ang II能夠顯著誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞I型膠原和α-SMA蛋白的表達(dá)，并具有一定的劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。給予 Ang II誘導(dǎo)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色可

4、見胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的α-SMA陽(yáng)性顯色，胞核內(nèi) SRF陽(yáng)性顯色。同時(shí) western blot檢測(cè)SRF、MRTF-A、α-SMA和I型膠原蛋白表達(dá)的上調(diào)，分別是對(duì)照組的3.4倍、3.5倍、3.3倍和6.8倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而予以Epac蛋白特異性激活劑（8-Me-cAMP）或 Ac-SDKP預(yù)處理，能夠抑制胞漿內(nèi)α-SMA和胞核內(nèi) SRF的陽(yáng)性表達(dá)，通過上調(diào)Epac1而非Epac2蛋白的表達(dá)，抑制Ang II誘導(dǎo)的