乙?；⒐艿鞍爪猎贏c-SDKP抗矽肺纖維化中的作用.pdf

1、目的：研究N-乙酰基-絲氨酰-天門冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）通過對乙?；⒐艿鞍爪粒ˋc-α-Tub）的調(diào)節(jié)，抑制矽肺大鼠纖維化的作用及其機制。并分析Ac-α-Tub在不同器官纖維化模型中的差異表達及其病理學特點。
　　方法：采用支氣管非暴露式一次性灌注 SiO2構(gòu)建矽肺大鼠模型，實驗分組為：對照4、8周組；矽肺模型4、8周組；Ac-SDKP抗纖維化治療組和預防治療組。原代培養(yǎng)大鼠肺成纖維細胞，實驗分組為：對照組、A

2、ng II誘導組、Ac-SDKP預處理組、纈沙坦（valsartan）預處理組和組蛋白去乙?；福℉DAC）6抑制劑（TCS HDAC620b）預處理組。采用HOPE-MED8050動式染塵系統(tǒng)構(gòu)建大鼠矽肺模型，設(shè)對照組及染塵2、4、8、16、24周組；單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型分為對照組，模型1、2、3周組；硫代乙酰胺（TAA）構(gòu)建肝纖維化模型，分為對照組，模型1、3、6周組。HE染色觀察病理形態(tài)。免疫組化和免疫熒光法檢測Ac-α-

3、Tub、α-平滑肌肌動蛋白（SMA）、波形蛋白（vimentin）、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白（SP-A）在組織中的定位和表達。免疫印跡法檢測Ac-α-Tub、I型膠原、α-SMA、HDAC6的蛋白表達水平。
　　結(jié)果：1、免疫組化結(jié)果顯示，Ac-α-Tub除可強表達于支氣管上皮細胞外，還可在肺泡壁上肺泡 II型上皮細胞、成纖維細胞和內(nèi)皮細胞中陽性表達，而在結(jié)節(jié)內(nèi)缺失表達，使用不同公司商品化抗體均獲得一致的結(jié)果。α-SMA除在氣管、血

4、管的平滑肌細胞內(nèi)陽性表達外，可強表達于矽結(jié)節(jié)區(qū)和間質(zhì)纖維化區(qū)域。免疫熒光結(jié)果顯示存在Ac-α-Tub和SP-A以及Ac-α-Tub和vimentin陽性共表達的細胞。免疫印跡結(jié)果顯示，與對照組相比，矽肺模型組I型膠原、α-SMA和HDAC6蛋白水平表達上調(diào)，而 Ac-α-Tub表達下調(diào)；予以 Ac-SDKP抗纖維化和預防治療能夠顯著上調(diào)Ac-α-Tub的表達，同時下調(diào)I型膠原、α-SMA和HDAC6蛋白水平。Ang II誘導的成纖維細胞

5、中α-SMA、HDAC6和I型膠原分別上調(diào)至對照組的1.66倍、3.56倍和4.00倍， Ac-α-Tub表達下調(diào)為對照組的44.44％（P<0.05）。給予 Ac-SDKP、纈沙坦或TCSHDAC620b預處理，能明顯抑制該變化。2、HE染色發(fā)現(xiàn)動式染塵能夠形成較為分明的“細胞性矽結(jié)節(jié)-細胞纖維性矽結(jié)節(jié)-纖維細胞性矽結(jié)節(jié)”的病理學特征，免疫化和免疫熒光結(jié)果顯示，vimentin標記的巨噬細胞多在結(jié)節(jié)內(nèi)高表達，而α-SMA標記的肌成纖維

6、細胞多包裹巨噬細胞或位于間質(zhì)纖維化區(qū)域，偶見巨噬細胞α-SMA陽性表達；而Ac-α-Tub表達于正常的肺泡壁上，而在矽結(jié)節(jié)及間質(zhì)纖維化區(qū)域缺失表達。3、免疫組化結(jié)果顯示，Ac-α-Tub在UUO模型中表達于近曲小管，在 TAA誘導的肝纖維化模型中其陽性表達于星狀細胞，且隨著造模時間的延長，陽性表達的細胞逐步增多。Ac-α-Tub在主動脈、心肌和骨骼肌細胞中均無陽性表達，而在食管、胃和大腸的神經(jīng)細胞中陽性表達，在肝臟組織中其陽性表達于肝間