基因缺失誘變對(duì)VLDLR結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的探討.pdf

1、VLDL受體是LDL受體家族的成員之一,其配體結(jié)合域有8個(gè)富含半胱氨酸的重復(fù)序列,每個(gè)重復(fù)序列由約40個(gè)氨基酸殘基組成.重復(fù)序列中含有保守的負(fù)電荷簇集區(qū),被認(rèn)為是配體結(jié)合們點(diǎn)為了探索人VLDL受體配體結(jié)構(gòu)域中這些重復(fù)序列在結(jié)構(gòu)配體脂蛋白中的作用.明確VLDL受體結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系.研究人員利用基因缺失誘變策略,對(duì)VLDL受體8個(gè)重復(fù)序列 進(jìn)行單個(gè)或聯(lián)合缺失并構(gòu)建VLDLR配體結(jié)合域不同重復(fù)序列缺失突變的真核表達(dá)載體.將正 常及突變的VLD

2、L受體基因異入缺乏VLDL受體的CHO細(xì)胞中,用LacZ基因監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率,用RT-PCR監(jiān)測(cè)外源基因的表達(dá),然后,檢測(cè)了VLDL受體不同的突變體β-VLDL結(jié)合的能力.配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:重復(fù)序列1,2,3,6的單個(gè)缺失對(duì)VLDLR結(jié)合β-VLDL的能力沒(méi)有影響,而重復(fù)序列5,7,8以及1-3,4-5,5-6聯(lián)合缺失時(shí),VLDLR結(jié)合β-VLDL的能力明顯降低.因此,類似于LDLR,在結(jié)合β-VLDL時(shí),VLDLR配體結(jié)合域各得復(fù)序列