探討APS-1患者中AIRE基因新突變位點(diǎn)對(duì)AIRE蛋白結(jié)構(gòu)及功能的影響.pdf

1、目的：收集中國(guó)APS-1的病例，通過(guò)對(duì)病例資料進(jìn)行分析整理，發(fā)現(xiàn)新的導(dǎo)致APS-1的AIRE基因突變位點(diǎn)，并驗(yàn)證該突變位點(diǎn)是否對(duì)AIRE蛋白的結(jié)構(gòu)及功能產(chǎn)生影響。
　　方法：(1)獲取臨床診斷為APS-1患者的病例，采集患者及其家系的血液樣本。(2)通過(guò)基因測(cè)序明確APS-1患者及其家系A(chǔ)IRE基因突變情況。(3)運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)檢測(cè)突變AIRE蛋白的同源二聚化性質(zhì)。(4)運(yùn)用流式檢測(cè)不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。(5)運(yùn)

2、用RT-qPCR檢測(cè)外周組織限制性抗原（TRAs）的表達(dá)水平，以檢測(cè)突變AIRE蛋白的功能有無(wú)變化。
　　結(jié)果：(1)獲取臨床診斷為APS-1患者的病例1例,對(duì)病例信息進(jìn)行分析整理。(2)明確APS-1患者及其家系A(chǔ)IRE基因突變情況：根據(jù)基因測(cè)序結(jié)果及患者家系的分析發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的AIRE基因突變位點(diǎn)c.206A>C。(3)成功構(gòu)建酵母雙雜交表達(dá)載體，酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：突變的AIRE蛋白與正常的AIRE蛋白無(wú)相互作用，從而提示

3、新AIRE基因突變位點(diǎn)通過(guò)影響AIRE蛋白的二聚化特性影響AIRE蛋白的結(jié)構(gòu)。(4)成功構(gòu)建真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，流式檢測(cè)結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染含突變AIRE基因質(zhì)粒的293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率及GFP表達(dá)量明顯低于轉(zhuǎn)染含正常AIRE基因質(zhì)粒及空載質(zhì)粒的293T細(xì)胞。(5)運(yùn)用RT-qPCR檢測(cè)外周組織限制性抗原的表達(dá)水平，結(jié)果表明：突變AIRE基因可以下調(diào)外周組織限制性抗原GAD65及TPH1的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：新發(fā)現(xiàn)的AIR