功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠對(duì)IL-1β致大鼠髓核細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　1.探究在體外條件下白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)對(duì)大鼠髓核細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用；
　　2.探究修飾有骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)-7(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)在體外條件下能否抑制IL-1β對(duì)大鼠髓核細(xì)胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)的凋亡誘導(dǎo)作用。
　　方法：<

2、br>　　體外分離培養(yǎng)SD大鼠的NPCs，取第3代NPCs分別在無(wú)BMP-7功能片段的RADA16-I或修飾有BMP-7功能片段的RADKPS中培養(yǎng)，然后加入IL-1β對(duì)大鼠髓核細(xì)胞進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。試驗(yàn)共分3組：A組（無(wú)IL-1β干預(yù)的RADA16-I組）、B組（有IL-1β干預(yù)的RADA16-I組）、C組（有IL-1β干預(yù)的RADKPS組）。凋亡誘導(dǎo)48小時(shí)后，分別通過(guò)CCK-8法及DAPI染色檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力；通過(guò)Calcein-

3、AM/PI雙染觀察各組細(xì)胞活性；分別通過(guò)DAPI染色和TUNEL熒光染色觀察各組細(xì)胞凋亡情況；通過(guò)RT-PCR檢測(cè)各組凋亡相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量，即自殺相關(guān)因子(Factor Associated Suicide,Fas),自殺相關(guān)因子配體(The Ligand of Factor Associated Suicide,FasLg),B細(xì)胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 As

4、sociated X Protein, Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-3)；通過(guò)RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量，即蛋白多糖(Aggrecan，AGG)，II型膠原(Collagen type II,COLII)和人性別決定區(qū)Y框蛋白9(Sex determining region Y-box9,SOX-9)

5、；通過(guò)Caspase-3和Caspase-9活性試劑盒檢測(cè)各組中Caspase-3和Caspase-9的活性。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞增殖能力：B組及C組中細(xì)胞的增殖能力較對(duì)照組A組均明顯降低（P<0.05），同時(shí)C組中細(xì)胞的增殖能力明顯高于B組（P<0.05）；
　　2.細(xì)胞活性（Calcein-AM/PI雙染）:B組及C組中死細(xì)胞所占的比例均明顯高于較對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中死細(xì)胞所占的比例明顯低于

6、B組（P<0.05）；
　　3.細(xì)胞凋亡（TUNEL染色）:B組及C組中凋亡細(xì)胞所占的比例均明顯高于對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中凋亡細(xì)胞所占的比例明顯低于B組（P<0.05）；
　　4.凋亡相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量：B組及C組中促進(jìn)凋亡的基因Fas,Bax及Caspase-3的mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中三者的mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯低于B組（P<0.05）；B組及C組中抗

7、凋亡的基因Bcl-2的mRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中Bcl-2的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于B組（P<0.05）；三組之間的FasLg的mRNA相對(duì)表達(dá)量均無(wú)明顯差異（P>0.05）；
　　5.細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量：B組及C組中AGG、COLII和SOX-9的mRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中三者mRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯高于B組（P<0.05）；

8、r>　　6. Caspase-3和Caspase-9的活性：B組及C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯高于對(duì)照組A組（P<0.05），同時(shí)C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯低于B組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)在體外條件下初步探索了IL-1β所誘導(dǎo)的SD大鼠髓核細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制可能是經(jīng)Fas介導(dǎo)的線粒體參與的II型凋亡途徑，同時(shí)修飾有BMP-7功能片段的功能化自組裝多肽