一種基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光原理的SIRT1探針設(shè)計(jì)及其在中藥藥效物質(zhì)篩選中的應(yīng)用.pdf

1、SIRT1(Sirtuins1)是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依賴的組蛋白去乙酰化酶1，通過(guò)對(duì)組蛋白及多種非組蛋白底物的去乙?；揎?，參與基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、分化等諸多生理過(guò)程。SIRT1激動(dòng)劑在心血管疾病及糖尿病等代謝綜合癥中有潛在的應(yīng)用前景，而SIRT1抑制劑目前可用于腫瘤治療。以白藜蘆醇為代表的天然SIRT1激動(dòng)劑近年來(lái)引起了學(xué)界的極大關(guān)注，而從中藥中篩選發(fā)現(xiàn)SIRT1激動(dòng)劑的技術(shù)方法及應(yīng)用實(shí)例還少見(jiàn)報(bào)道。
　　本文

2、基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光(Aggregation-Induced Emission，AIE)原理，設(shè)計(jì)了一種新型熒光探針用于SIRT1活性檢測(cè)。并應(yīng)用該探針，實(shí)現(xiàn)了活細(xì)胞中SIRT1活性檢測(cè)和中藥化合物庫(kù)中SIRT1激動(dòng)劑/抑制劑的同時(shí)篩選。
　　主要研究成果如下:
　　1.基于AIE原理，制備了含一個(gè)羧基的TPE衍生物作為熒光生色團(tuán)，制備了肽段Gly-Lys(Ac)-Try-Asp-Asp作為SIRT1酶催化的底物，通過(guò)固相合成連

3、接構(gòu)成了檢測(cè)SIRT1的新型、靈敏、專一性的熒光探針。對(duì)熒光探針的“開(kāi)-關(guān)”效應(yīng)及其用于SIRT1蛋白活性檢測(cè)的方法學(xué)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，熒光探針具有良好的靈敏度、線性范圍和特異性，可用于特異性檢測(cè)SIRT1蛋白活性。
　　2.構(gòu)建了基于熒光探針的體外SIRT1活性檢測(cè)方法與活細(xì)胞中SIRT1活性檢測(cè)方法，應(yīng)用于SIRT1激動(dòng)劑與抑制劑篩選。對(duì)195個(gè)中藥化合物進(jìn)行SIRT1調(diào)節(jié)劑的篩選，并對(duì)篩選到的化合物進(jìn)行了量效驗(yàn)證。結(jié)果表

4、明，熒光探針不僅可以實(shí)現(xiàn)體外SIRT1蛋白抑制劑和激動(dòng)劑的雙重篩選，也可以實(shí)現(xiàn)基于活細(xì)胞成像的SIRT1調(diào)節(jié)劑篩選。從中藥化合物庫(kù)中篩選到了19個(gè)SIRT1激動(dòng)劑，大部分來(lái)自于具有補(bǔ)益作用的人參、麥冬以及收澀作用的五味子。
　　3.運(yùn)用細(xì)胞內(nèi)SIRT1活性檢測(cè)方法和表面離子共振(SPR)技術(shù)對(duì)篩選到的4個(gè)SIRT1激動(dòng)劑進(jìn)行了SIRT1蛋白激動(dòng)作用的驗(yàn)證，并對(duì)人參皂苷Rb2、人參皂苷Rc、人參皂苷F1、五味子甲素等4個(gè)SIRT1激