含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯對(duì)SAMP8小鼠免疫功能影響研究.pdf

1、1.含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯含藥血清對(duì)SAMP8小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能影響研究
　　目的：以含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯及等體積生理鹽水分別灌胃青齡小鼠后制備含藥血清，將含藥血清與SAMP8小鼠脾臟淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)含藥血清對(duì)SAMP8小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖能力，培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量，T淋巴細(xì)胞亞群以及脾淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA和蛋白的表達(dá)的影響，以比較含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯含藥血清對(duì)SAMP8小鼠脾臟淋巴細(xì)胞免疫功能影響并探討

2、相關(guān)機(jī)制。
　　方法：取清潔級(jí)昆明種青齡小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只，分別以含紅芪的益氣養(yǎng)血湯，含黃芪的益氣養(yǎng)血湯每日6g·Kg-1劑量以及等體積的生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)灌胃14次，末次灌胃兩小時(shí)后眼球摘除取血，制備含藥血清。益氣養(yǎng)血紅芪組、益氣養(yǎng)血黃芪組及空白血清組分別按照最佳含藥血清培養(yǎng)濃度和時(shí)間與SAMP8小鼠脾臟淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，青齡鼠組和SAMP8組以含10％胎牛血清的完全培養(yǎng)液分別與青齡小鼠脾淋巴

3、細(xì)胞及SAMP8小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)。以MTT法檢測(cè)各組淋巴細(xì)胞在ConA誘導(dǎo)下的體外增殖能力，以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組T淋巴細(xì)胞亞群分化，ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA的表達(dá)量，Western-Blot檢測(cè)各組淋巴細(xì)胞內(nèi)p38蛋白含量。
　　結(jié)果：與青齡鼠組相比較SAMP8組脾淋巴細(xì)胞體外增殖能力明顯降低；T淋巴細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞百分比明顯降低，CD4

4、+T細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+明顯升高，CD152+T細(xì)胞百分比也明顯升高；細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量減少；脾淋巴細(xì)胞中p38 mRNA及蛋白的表達(dá)減少，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白血清組相比給藥組脾淋巴細(xì)胞體外增殖能力明顯增強(qiáng)；T淋巴細(xì)胞中CD152+T細(xì)胞百分比也明顯降低；細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量增多；脾淋巴細(xì)胞中p38 mRNA及蛋白的表達(dá)升高，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與益氣養(yǎng)血

5、黃芪組相比紅芪組淋巴細(xì)胞增殖能力較強(qiáng)；T淋巴細(xì)胞中CD152+T細(xì)胞百分比較低；培養(yǎng)上清液中IL-2含量較多；淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA表達(dá)較高，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯含藥血清均能促進(jìn)SAMP8小鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外增殖，影響T細(xì)胞亞群分化，增加IL-2和IFN-γ的分泌，提高淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白的表達(dá)，改善衰老小鼠免疫功能，且在提高增殖能力、促進(jìn)IL-2分泌及提高p38mR

6、NA的表達(dá)量方面紅芪組優(yōu)于黃芪組。
　　2.含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯對(duì)SAMP8小鼠免疫功能影響研究
　　目的：以含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯、胸腺肽及等體積生理鹽水分別灌胃SAMP8小鼠和青齡小鼠后取血及脾臟，檢測(cè)含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯對(duì)SAMP8小鼠血清中細(xì)胞因子含量，脾臟T淋巴細(xì)胞亞群以及脾淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA和蛋白表達(dá)的影響，以比較含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯對(duì)SAMP8小鼠免疫功能的影響并探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法：

7、取昆明種青齡小鼠10只為青齡鼠組，SAMP8小鼠40只隨機(jī)分為4組：胸腺肽組、生理鹽水組、益氣養(yǎng)血紅芪組和益氣養(yǎng)血黃芪組。分別以生理鹽水，胸腺肽每日4.6mg?Kg-1，含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯每日6g?Kg-1劑量灌胃小鼠，每日1次，連續(xù)灌胃14次，末次灌胃后兩小時(shí)眼球摘除取血及脾臟，制成血清和脾淋巴細(xì)胞懸液。ELISA檢測(cè)其血清IL-2、IFN-γ含量，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其脾臟淋巴細(xì)胞表面CD3、CD4、CD8、CD28及CD152分子的

8、表達(dá)情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)其p38 mRNA的表達(dá)情況，Western-Blot及免疫組化法檢測(cè)其p38蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：與青齡鼠組比較生理鹽水組SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量降低；脾臟T淋巴細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞和CD28+T細(xì)胞百分比降低，CD4+T細(xì)胞百分比增高，CD152+T細(xì)胞百分比增高；脾淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白表達(dá)降低，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與生理鹽水組相比胸腺肽組及中藥組均能提

9、高SAMP8小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量，胸腺肽組含量高于中藥組，紅芪組IL-2含量高于黃芪組；胸腺肽組及中藥組均能提高T淋巴細(xì)胞中CD28+T細(xì)胞百分比，降低CD152+T細(xì)胞百分比，胸腺肽組及黃芪組CD152+T細(xì)胞百分比低于紅芪組；中藥組能提高SAMP8小鼠T淋巴細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞百分比，且黃芪組CD8+T細(xì)胞百分比高于紅芪組；胸腺肽組及黃芪組能降低CD4+T細(xì)胞百分比；胸腺肽組及中藥組均能提高p38 mRNA表達(dá)，且胸腺

10、肽組mRNA表達(dá)高于中藥組，黃芪組高于紅芪組；胸腺肽組及中藥組均能提高p38蛋白含量及蛋白陽(yáng)性率，且胸腺肽組優(yōu)于中藥組，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯均能通過(guò)提高SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量，影響脾臟T細(xì)胞亞群分化，增加脾淋巴細(xì)胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白表達(dá)，改善SAMP8小鼠的免疫功能，且在提高CD8+T細(xì)胞百分比方面益氣養(yǎng)血湯復(fù)方作用優(yōu)于胸腺肽，在提高血清中IL-2含量方面紅芪