聚已內(nèi)酯材料表面的肝素化修飾及五種肝素修飾酶的表達(dá).pdf

1、聚己內(nèi)酯(PCL)是一種生物高分子材料，被廣泛地應(yīng)用于各種生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。為了增強(qiáng)聚己內(nèi)酯的生物相容性，需要在聚己內(nèi)酯材料表面進(jìn)行肝素化修飾，使肝素以共價(jià)鍵的形式穩(wěn)定地結(jié)合在聚己內(nèi)酯表面。通過(guò)終點(diǎn)固定的方法，利用醛基和氨基發(fā)生席夫堿反應(yīng)，把肝素固定在聚己內(nèi)酯材料表面。用甲苯胺藍(lán)染色法測(cè)得肝素固定化效率為6μg/cm2。用X射線光電子能譜(XPS)和傅里葉紅外光譜進(jìn)一步檢測(cè)分析材料結(jié)構(gòu)。XPS分析發(fā)現(xiàn)肝素化聚己內(nèi)酯材料表面增加了氮、硫、鈉等

2、元素信號(hào);傅里葉紅外光譜分析表明該材料增加了C-N和N-H振動(dòng)峰。這些實(shí)驗(yàn)證明肝素已經(jīng)與聚己內(nèi)酯形成了共價(jià)結(jié)合。為了研究固定化肝素的結(jié)構(gòu)和功能，本文還構(gòu)建了gor trxB缺陷型大腸桿菌，用該菌株表達(dá)了五種肝素修飾酶。谷胱甘肽還原酶(Gor)和硫氧還蛋白還原酶(TrxB)是氧化還原體系中重要的兩種酶，敲除trxB基因和gor基因能阻斷大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)的氧化還原途徑，增強(qiáng)二硫鍵的形成，保證外源蛋白的正常折疊。本文通過(guò)λ-red重組系統(tǒng)敲除大