CTR1核心巖藻糖基化修飾在卵巢癌細(xì)胞順鉑吸收過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用.pdf

1、上皮性卵巢癌是目前為止全世界最致命的婦科惡性腫瘤。對(duì)于患者來說，卵巢癌的常規(guī)治療是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后聯(lián)合鉑類與紫杉醇的一線化療方案。卵巢癌患者對(duì)于鉑和紫杉醇一線化療的臨床反應(yīng)率大約有80％。雖然具有高的響應(yīng)率，但是上皮性卵巢癌的耐藥性較高，預(yù)后性差，晚期卵巢癌患者5年的生存率小于30％。
　　耐藥性的產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)鉑類藥物攝入的減少、解毒的能力增強(qiáng)、凋亡途徑異常以及DNA損傷后DNA修復(fù)能力的增強(qiáng)等相關(guān)。其中，順鉑攝取的抑制被認(rèn)為

2、是卵巢癌順鉑耐藥的主要原因，它通常發(fā)生在卵巢惡性腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化過程中。細(xì)胞膜上的銅轉(zhuǎn)運(yùn)體1(CTR1)是一種銅離子的轉(zhuǎn)運(yùn)體，在調(diào)節(jié)銅的穩(wěn)態(tài)過程中起著關(guān)鍵作用，同時(shí)也是酵母和哺乳動(dòng)物中攝取順鉑的關(guān)鍵分子。
　　核心巖藻糖基化是由核心巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(Fut8)催化下進(jìn)行的。核心巖藻糖基化通過改變糖蛋白的構(gòu)象、定位及表達(dá)，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮重要生理作用。核心巖藻糖基化可以調(diào)節(jié)細(xì)胞表面蛋白CTR1與鉑類之間的相互作用，進(jìn)而影響癌細(xì)胞的鉑類藥物攝

3、取及耐藥性的獲得。CTR1介導(dǎo)的順鉑攝取依賴于其金屬結(jié)合外顯子結(jié)構(gòu)域，由于該結(jié)構(gòu)域具有N-糖基化位點(diǎn)，推測(cè)N-糖基化與順鉑攝入密切相關(guān)，而CTR1核心巖藻糖基化在卵巢癌中的順鉑攝取和鉑的耐藥作用機(jī)理尚未闡明。
　　目的:闡明CTR1核心巖藻糖基化與卵巢癌順鉑耐藥機(jī)制的相關(guān)性。
　　方法:通過凝集素印記方法檢測(cè)卵巢癌患者和正常人血清之間核心巖藻糖基化水平差異。通過凝集素印記、qPCR、MTT、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)

4、順鉑敏感型細(xì)胞與順鉑耐藥性細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。在卵巢癌患者的病理切片中，通過免疫組化的方法檢測(cè)癌組織與癌旁組織的CTR1的表達(dá)的差異，同時(shí)，用流式細(xì)胞術(shù)、免疫沉淀、電感耦合等離子體質(zhì)譜以及檢測(cè)CTR1與順鉑之間的相互作用。然后，通過構(gòu)建核心巖藻糖敲除的特定細(xì)胞系以及恢復(fù)模型，進(jìn)一步的驗(yàn)證核心巖藻糖基修飾與順鉑耐藥性之間的關(guān)系。最后，利用磷酸化的實(shí)驗(yàn)，研究卵巢癌細(xì)胞以及小鼠的卵巢上皮細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　結(jié)果:在血清的檢測(cè)中，與

5、正常人相比，卵巢癌患者的血清中核心巖藻糖基化水平明顯增多。順鉑化療的患者血清中核心巖藻糖基化水平明顯高于正常人和未經(jīng)過化療的患者的血清。在卵巢癌的細(xì)胞系中，順鉑耐藥型細(xì)胞的核心巖藻糖基化水平明顯高于順鉑敏感型細(xì)胞，并且，經(jīng)過順鉑處理之后，與敏感性細(xì)胞相比，耐藥型細(xì)胞的存活率高、細(xì)胞凋亡率低。雖然CTR1在細(xì)胞膜上的表達(dá)在兩種細(xì)胞中無明顯的差異，但順鉑耐藥型細(xì)胞的核心巖藻糖基化水平要明顯的高于順鉑敏感型細(xì)胞。與順鉑敏感型細(xì)胞相比，順鉑耐藥

6、型細(xì)胞膜表面CTR1與順鉑之間的相互作用明顯減弱。還有，在順鉑耐藥型細(xì)胞中，鉑的吸收量明顯低于順鉑敏感型細(xì)胞。在小鼠卵巢上皮細(xì)胞中，核心巖藻糖基化修飾的缺失促進(jìn)細(xì)胞對(duì)順鉑的攝取。
　　結(jié)論:順鉑耐藥型細(xì)胞中CTR1的核心巖藻糖基化水平顯著高于順鉑敏感型細(xì)胞。高核巖藻糖基化抑制了CTR1與順鉑的相互作用及順鉑攝取。Fut8+/+卵巢上皮細(xì)胞相比，在Fut8-/-小鼠卵巢上皮細(xì)胞中順鉑的攝取量明顯增多，而在Fut8基因恢復(fù)細(xì)胞模型中順