助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠孕早期子宮內(nèi)膜蛻膜化的影響.pdf

1、實驗目的：
　　基于前期對助孕Ⅰ號方的臨床療效研究及實驗研究，本實驗研究助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對改善腎虛血瘀模型大鼠妊娠的作用。觀察助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠第8天的黃體、生殖激素及其受體、蛋白分子、子宮內(nèi)膜蛻膜化、妊娠率及胚泡著床點數(shù)的作用，探討其可能的作用機理，為助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀不孕癥患者、圍試管期患者的臨床應用提供數(shù)據(jù)及理論支持。
　　實驗方法：
　　通過陰道涂片篩選動情前期的成

2、熟未交配雌性SD大鼠60只，隨機分為空白組、模型組、助孕Ⅰ號方低劑量組、助孕Ⅰ號方高劑量組、五子組、丹參組。模型組及各治療組用羥基脲+腎上腺素建立腎虛血瘀模型。在造模的同時，各治療組予以干預，造模成功后，雌鼠于動情期合籠，發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子記為妊娠第1天，停止給藥，分籠飼養(yǎng)，妊娠第8天股動脈取血，放射免疫法測定血清E2和P水平，之后頸椎脫臼處死大鼠，剖腹取出大鼠的子宮、卵巢，計數(shù)各組大鼠的妊娠只數(shù)和胚泡著床點數(shù)，切片染色后，在光

3、鏡下觀察各組大鼠的黃體和子宮內(nèi)膜蛻膜組織的形態(tài)學特征，免疫組化法檢測子宮內(nèi)膜蛻膜中ER、PR、LN、integrinβ3的表達。
　　實驗結(jié)果：
　　1.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠妊娠率、胚泡著床點數(shù)的影響
　　與空白組比較，模型組大鼠的妊娠率、胚泡著床點數(shù)明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組大鼠的妊娠率、胚泡著床點數(shù)明顯升高（P＜0.05）。
　　2.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模

4、型大鼠妊娠第8天黃體的影響
　　與空白組比較，模型組大鼠妊娠第8天黃體面積總和、r/R明顯降低（P＜0.01-0.05）；與模型組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組的黃體面積總和、助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組的黃體面積和r/R明顯升高（P＜0.01-0.05）；與五子組比較，助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組大鼠妊娠第8天黃體面積總和明顯增加（P＜0.05）；與丹參組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組、助孕Ⅰ號方（14.6g

5、/kg）組大鼠黃體面積總和明顯增加（P＜0.05）。
　　3.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠妊娠第8天的子宮內(nèi)膜蛻膜化的影響
　　正常組大鼠子宮內(nèi)膜蛻膜組織間質(zhì)細胞為多邊形或類圓形樣上皮細胞，細胞排列嵌緊，透明，核呈卵圓形，位于中央，染色淡藍，核仁大而明顯，無核凋亡，胞質(zhì)豐富，染色淡，血管豐富。與空白組比較，模型組大鼠子宮蛻膜組織大部分蛻膜細胞形態(tài)不規(guī)則，胞漿明顯水腫，細胞排列疏松，部分核消失，部分細胞核凋亡，血管數(shù)量明顯減少

6、（P＜0.01）；與模型組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組、助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組子宮蛻膜組織細胞為多邊形或類圓形樣上皮細胞，排列比較緊密，透明，核呈卵圓形，位于中央，染色淡藍，核仁大而明顯，無核凋亡，胞質(zhì)豐富，染色淡，蛻膜組織血管增加（P＜0.05）；與模型組比較，五子組和丹參組大鼠子宮蛻膜組織細胞形態(tài)較規(guī)則，部分胞漿腫脹，排列較密，少數(shù)細胞核消失，胞質(zhì)豐富，染色淡，血管較豐富，但是差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；助孕

7、Ⅰ號方（14.6g/kg）組大鼠妊娠第8天子宮蛻膜組織血管增加優(yōu)于五子組（P＜0.05）。
　　4.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠妊娠第8天的血清E2、P水平影響
　　與空白組比較，模型組大鼠血清E2、P水平明顯降低（P＜0.05-0.01）；與模型組比較，助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組的大鼠血清E2、P水平和五子組大鼠血清的P水平明顯升高（P＜0.05-0.01）。
　　5.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠妊娠第8天子宮

8、蛻膜組織的ER、PR影響
　　與空白組比較，模型組大鼠子宮蛻膜組織ER、PR面積總和、積分光密度明顯降低（P＜0.05-0.01），與模型組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組、助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組大鼠子宮蛻膜組織ER、PR的面積總和、積分光密度及丹參組的PR積分光密度明顯升高（P＜0.05-0.01）；與五子組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組大鼠子宮蛻膜組織PR的積分光密度明顯升高（P＜0.01）；與丹參組比較，

9、助孕Ⅰ號方組大鼠子宮蛻膜組織ER、PR表達明顯升高（P＜0.05-0.01）。
　　6.助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠子宮蛻膜組織LN、integrinβ3影響
　　與空白組比較，模型組大鼠子宮蛻膜組織LN面積總和、積分光密度明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，助孕Ⅰ號方（7.3g/kg）組大鼠子宮蛻膜組織LN的面積總和及助孕Ⅰ號方（14.6g/kg）組子宮蛻膜組織LN面積總和、積分光密度、integrinβ3面積總和明顯

10、增加（P＜0.05-0.01），五子組大鼠子宮蛻膜組織LN的面積總和明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　實驗結(jié)論：
　　助孕Ⅰ號方（即補腎活血法中藥）孕前直腸給藥可改善腎虛血瘀模型大鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化，促進血管生成，增加胚泡著床點數(shù)、提高妊娠率，其可能機制如下：
　　1.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥可促進腎虛血瘀模型大鼠黃體發(fā)育，增加黃體面積，療效優(yōu)于單用補腎法中藥和活血法中藥，改善黃體形狀，從而促進分泌E2、P