廣泛型線粒體肌酸激酶在肝癌分子診斷中的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、目的：通過檢測uMtCK在慢性乙肝患者、活動性肝硬化患者及原發(fā)性肝癌患者血清及病理組織中的表達(dá)情況，研究其與原發(fā)性肝癌臨床診斷的相關(guān)性；通過檢測 uMtCK在體外肝癌細(xì)胞系表達(dá)及檢測其與體外肝癌細(xì)胞增殖及凋亡的關(guān)系，為揭示其可能作為肝癌血清學(xué)標(biāo)志物及潛在治療靶點的可行性提供理論和實踐基礎(chǔ)。
　　方法：應(yīng)用 ELASA方法檢測 uMtCK在慢性乙肝患者、乙肝相關(guān)活動性肝硬化、原發(fā)性肝癌患者共50例血清中表達(dá)情況，明確uMtCK與肝癌

2、血清學(xué)診斷相關(guān)性；檢測 uMtCK在正常肝臟、乙型肝炎相關(guān)活動性肝硬化、原發(fā)性肝癌組織共160例病理芯片的表達(dá)，比較其在不同病理組織中表達(dá)差異；通過WestBlot檢測u MtCK在體外細(xì)胞系中的表達(dá)情況，運用MTT及流式細(xì)胞術(shù)檢測uMtCK與體外細(xì)胞增殖與凋亡的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?。?）50例患者（10例慢性乙肝患者、20例肝硬化患者、20例肝癌患者）血清中，20例肝癌患者uMtCK含量大于30U/L的有12例（60％

3、），顯著高于肝硬化及乙型肝炎組（p<0.05）。
　?。?）160例肝臟病理組織中（32例慢性乙肝患者，64例肝硬化患者，64例肝癌患者），慢性乙肝患者肝組織中uMtCK的陽性率為16.6%（5/32），其中有1例（3.1%）中強度染色（2+）；肝硬化組織中uMtCK的陽性率為46.9％（30/64），其中有3例（4.7%）中強度染色（2+）；肝癌組織中uMtCK的陽性率為65.7%（42/64），其中有6例（9.4%）中強度染色

4、（2+）。uMt CK在肝癌組織中表達(dá)量和強陽性（2+）比率高于活動性肝硬化組（p<0.05）。
　?。?） WesternBlot顯示uMtCK在肝癌細(xì)胞系HepG-2中表達(dá)量顯著增強；MTT法檢測顯示沒有轉(zhuǎn)染uMtCK的細(xì)胞的增殖受到抑制；轉(zhuǎn)染uMtCK的HepG-2細(xì)胞中24小時可顯示促增殖作用，Huh-7細(xì)胞中48小時顯示出uMtCK的促增殖作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測uMtCK-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)轉(zhuǎn)染

5、的HepG-2細(xì)胞系，結(jié)果顯示在轉(zhuǎn)染24小時后uMtCK組的早期凋亡細(xì)胞數(shù)（2.68%）小于空白組的早期凋亡數(shù)（3.12%），同樣經(jīng)此法檢測uMtCK-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)轉(zhuǎn)染的Huh-7細(xì)胞系，結(jié)果顯示在轉(zhuǎn)染48小時后 uMtCK組的早期凋亡細(xì)胞數(shù)（5.11%）小于空白組的早期凋亡數(shù)（5.68%）
　　結(jié)論：uMtCK在肝癌患者的血清及病理組織中均存在高表達(dá)的現(xiàn)象；uMtCK可促進體外肝癌細(xì)胞的增殖，抑