白花、紫花丹參中丹參酮類成分的差異性及其抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用研究.pdf

1、丹參為唇形科植物丹參（Salviamiltiorrhiza Bge.）的干燥根及根莖，是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥中普遍應(yīng)用的藥物之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是常用的活血化瘀中藥。根據(jù)花色的不同，丹參分為白花丹參和紫花丹參。丹參酮是其主要化學(xué)成分，研究表明丹參酮類化合物具有良好的抗炎功能。本文將首先對白花丹參和紫花丹參中丹參酮類成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)兩種花色丹參中丹參酮類成分的差異，然后對白花丹參中丹參酮類化合物進(jìn)行分離提取及結(jié)構(gòu)鑒定，最后進(jìn)行丹參酮II

2、A、丹參酮I和甲基丹參酮的抗炎活性機(jī)理研究。
　　為研究白花丹參和紫花丹參中丹參酮類成分和含量的差異，采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行測定，色譜柱為Agilent XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以甲醇和水(含體積比0.1％甲酸)為流動相，梯度洗脫，選取十個丹參酮類化合物為對照品，在280nm處測定白花丹參、山東紫花丹參和四川紫花丹參中各丹參酮類成分的含量。結(jié)果表明，丹參酮IIA在2.00-100.00μ

3、g（Y=40.601X+159.68，r=0.9979）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率RSD為0.46%；丹參酮I在2.00-100.00μg（Y=22.335X+72.957，r=0.9975）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.76%；柳杉酚在2.00-100.00μg（Y=30.296X+98.144，r=0.9984）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為2.28%；彌羅松酚在2.00-100.00μ

4、 g（Y=6.7841X+27.737，r=0.9982）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.37%；隱丹參酮在2.00-100.00μ g（Y=19.936X+72.423，r=0.9981）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為2.09%；丹參新醌 B在2.00-100.00μ g（Y=41.554X+161.46，r=0.9978）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.27%；丹參新醇在2.00-

5、100.00μ g（Y=23.688X+64.779，r=0.9984）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.98%；鼠尾草酚酮在2.00-100.00μ g （Y=79.323X-66.428，r=0.9999）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.93%；二氫丹參酮 I在2.00-100.00μg（Y=52.933X+194.45，r=0.9980）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率 RSD為1.

6、86%；甲基丹參酮在2.00-100.00μ g（Y=27.794X+0.392，r=0.9999）范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率RSD為1.72%。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。結(jié)果表明不同種類丹參中丹參酮類成分含量差異較大，從白花丹參中檢測到柳杉酚、丹參新醌B和丹參新醇三種丹參酮類成分，而在紫花丹參中沒有檢測到這三種成分。
　　為提取分離到丹參酮類化合物，采用二氯甲烷和甲醇浸提，硅膠柱層析法和凝膠柱層析法分離純化。以環(huán)己烷

7、：二氯甲烷（10:1）混合溶劑溶解丹參酮提取物，濕法上樣，洗脫流速為1BV/h，用不同比例的環(huán)己烷-二氯甲烷梯度洗脫，洗脫5-6個柱體積。分別得到環(huán)己烷-二氯甲烷（10:1）部位，環(huán)己烷-二氯甲烷（1:2）部位和純二氯甲烷部位。以二氯甲烷-甲醇不同梯度洗脫環(huán)己烷-二氯甲烷（1:2）部位，得到7個部位（部位FrA—FrG）和四個化合物。其中FrE部位用不同比例的環(huán)己烷-二氯甲烷梯度洗脫分離得到兩個化合物；FrF部位用不同比例的環(huán)己烷-二氯

8、甲烷梯度洗脫和HPLC半制備分離得到兩個化合物；FrG部位用不同比例的環(huán)己烷-二氯甲烷梯度洗脫分離得到兩個化合物。對分離得到的10種丹參酮類化合物進(jìn)行1HNMR、13CNMR等波譜數(shù)據(jù)分析，并結(jié)合文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫比對，最終確定這10種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并使用LC-MS/MS初步確定了一種新化合物的結(jié)構(gòu)。
　　通過完全弗氏佐劑致敏小鼠，獲得類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型，以研究丹參酮IIA、丹參酮I和甲基丹參酮的抗炎作用。結(jié)果表明造模后各組小鼠之間

9、的足爪腫脹程度相比空白組差異顯著，給藥后，陽性藥組、丹參酮IIA組，丹參酮I組，甲基丹參酮組的小鼠足趾腫脹程度與模型組相比明顯減輕；模型組小鼠血清中的 IFN-γ水平明顯低于空白組，給藥后各組小鼠血清中的IFN-γ水平較模型組升高（P<0.05）， 模型組小鼠血清中的 IL-4、LTB4、NO水平明顯高于空白組，給藥后各組小鼠血清中的IL-4、LTB4、NO水平較模型組降低（P<0.05）；模型組中的小鼠發(fā)現(xiàn)跺關(guān)節(jié)滑膜組織中出