同種異體富血小板血漿對(duì)兔骨缺損修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)旨在觀察不同時(shí)間同種異體富血小板血漿聯(lián)合同種異體骨植入對(duì)骨缺損修復(fù)的影像學(xué)和組織學(xué)變化，以探討同種異體富血小板血漿對(duì)骨缺損植骨修復(fù)的療效，從而為臨床工作提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)及指導(dǎo)意見(jiàn)。
　　方法：
　　1實(shí)驗(yàn)分組：選取健康新西蘭大白兔36只，于兔的雙下肢股骨內(nèi)側(cè)髁建立骨缺損的模型后按分籠飼養(yǎng)編號(hào)隨機(jī)分為A、B兩組，A組（實(shí)驗(yàn)組，n=18），同種異體骨復(fù)合同種異體富血小板血漿植入；B組（對(duì)照組,n=18），

2、單純植入同種異體骨，另取6只單純建立骨缺損模型，缺損不做處理作為模型組。
　　2同種異體PRP的制備：心臟取血50ml，分別移入10ml離心管進(jìn)行二次離心，第一次以200g離心力，離心10min，第二次同樣以200g離心力離心，時(shí)間同上，制備PRP約1ml，將PRP與同種異體骨按2:1比例混合激活后，制成復(fù)合型PRP凝膠。
　　3血小板計(jì)數(shù)：心臟取血后，使用血細(xì)胞分析儀，取少量血液進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，記錄全血中血小板數(shù)，參考La

3、ndesberg法通過(guò)兩次離心法制備PRP，同樣對(duì)PRP進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，驗(yàn)證二次離心法制備出的PRP是否滿足實(shí)驗(yàn)要求。
　　4觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：第4、8、12周時(shí)，采用過(guò)量麻醉的方法處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，首先設(shè)定特定的曝光條件攝股骨髁側(cè)位X光片(距離1m，條件220KV,30mA．曝光時(shí)間0.15s)，觀察骨缺損植骨愈合情況。參照Yang氏放射學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，并通過(guò)X線平片測(cè)量記錄其骨缺損區(qū)上、中、下三點(diǎn)的阻射密度值，取平均值進(jìn)行統(tǒng)

4、計(jì)分析。而后截取標(biāo)本對(duì)其進(jìn)行大體標(biāo)本觀察，觀察植入材料的表面變化和骨組織缺損區(qū)域植入骨的生長(zhǎng)修復(fù)情況。制作病理組織切片及免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察兔骨缺損再生與修復(fù)情況；并根據(jù)Lane氏組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每組動(dòng)物的骨修復(fù)情況進(jìn)行評(píng)分；應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)（HMIAS-2000）和專業(yè)圖像分析軟件（Image-Pro Plus6.0）計(jì)算其免疫組化切片的染色陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度（Mean Optical Density，MOD）值,進(jìn)行統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1一般情況及大體觀察：術(shù)后所有動(dòng)物切口愈合良好，從缺損邊界和骨痂形成情況，術(shù)后4周和8周時(shí)，A組比B組缺損區(qū)組織修復(fù)骨缺損較平整，修復(fù)較好，術(shù)后12周，A組和B組骨組織缺損區(qū)域均得到完全修復(fù)，邊界已無(wú)法分辨，部分可見(jiàn)異位骨化；
　　2全血及PRP血小板計(jì)數(shù)情況：PRP中血小板數(shù)量為全血中的（4.30±0.28）倍，符合Landesberg法通過(guò)兩次離心制備PRP的要求，滿足了目前實(shí)驗(yàn)需求；<

6、br>　　3影像學(xué)評(píng)分及觀察結(jié)果：術(shù)后4、8、12周各時(shí)間點(diǎn)A組與B組兩組放射學(xué)評(píng)分比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A組評(píng)分顯著高于B組；而A組與B組兩組術(shù)后各期X線阻射密度比較，A組阻射密度值優(yōu)于B組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　4組織學(xué)評(píng)分及鏡下觀察情況：術(shù)后4、8、12周各時(shí)期A組和B組Lane組織學(xué)評(píng)分比較，實(shí)驗(yàn)組評(píng)分均高于對(duì)照組，且比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果顯示術(shù)后

7、各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組成骨的面積均高于對(duì)照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而免疫組化觀察結(jié)果顯示第4和8周時(shí)A組PDGF、TGF-β免疫組化切片平均光密度（MOD）明顯高于B組,比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明第4和8周時(shí)PDGF、TGF-β蛋白的表達(dá)量高于對(duì)照組；術(shù)后第12周時(shí)，PDGF、TGF-β蛋白的表達(dá)量均較第4和8周時(shí)下降，且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：