自體富血小板血漿對兔膝關節(jié)軟骨損傷修復作用的研究.pdf

1、目的:關節(jié)軟骨是一種特殊的致密結締組織，其表面光滑，具有獨特的生物學性能，可以使其有效的傳輸和分散負荷，從而能減少相鄰兩骨接觸面的摩擦力，緩沖運動時所產(chǎn)生的震動。關節(jié)軟骨可以在退行性骨關節(jié)病或者暴力損傷等過程中被破壞，從而引起關節(jié)軟骨損傷。由于缺乏血管而且軟骨細胞為終末分化細胞，所以軟骨自身的修復能力極差，損傷很難自愈，尤其是未達到軟骨下骨的損傷。傳統(tǒng)的治療軟骨損傷的方法有保守治療和手術治療兩種，保守治療即口服非甾體抗炎藥物或關節(jié)內(nèi)注射

2、玻璃酸鈉等，此種方法只是延緩了關節(jié)軟骨損傷的進一步發(fā)展的速度，緩解疼痛程度，并沒有從根本上解決關節(jié)軟骨損傷問題;手術治療則對手術指證要求比較嚴格并且遠期療效并不理想。為了探索治療關節(jié)軟骨損傷的新方法，本實驗研究通過對18只兔雙膝關節(jié)進行軟骨損傷造模后關節(jié)內(nèi)注入PRP，了解PRP在軟骨損傷修復過程中是否有促進作用，并對其修復組織進行大體觀察及顯微鏡下觀察，確定新生組織成分，進一步探討PRP在促進關節(jié)軟骨損傷修復過程中的作用。
　　

3、 方法:1、分組:實驗用3-4月齡新西蘭大白兔18只，隨機分為三組，每組6只。三組實驗動物分別于術后第1、3、5周處死，命名為1周組、3周組、5周組。全部實驗動物左膝關節(jié)內(nèi)側髁軟骨為對照側，右膝內(nèi)側髁軟骨為實驗側，進行自身對照。
　　 2、采血:每只實驗動物均于耳中心動脈處緩慢抽取約7-8ml動脈血，其中5ml注入肝素鋰抗凝的真空采血管中，2ml注入EDTA-K2抗凝的真空采血管中，備用。
　　 3、PRP的制備:應用二

4、次離心法制備PRP，第一次離心轉速2000r/min，時間10min，離心后注射器吸取交界層以下2mm的紅細胞并棄去，剩余部分放入離心機中配平后進行第二次離心，轉速2000r/min，時間10min，離心后用注射器吸取血清層的上方3/4部分并棄去，剩余部分即為PRP。5ml兔動脈血可制備約0.5mlPRP。
　　 4、血小板計數(shù):將采血時得到的EDTA-K2抗凝的2ml血液以及制成的PRP放入血細胞分析儀中進行血小板計數(shù)。

5、>　　 5、軟骨損傷造模及干預:每只實驗動物均采用膝前正中切口切開膝關節(jié)前方皮膚后以髕旁內(nèi)側入路切開膝關節(jié)囊，充分暴露兔膝關節(jié)內(nèi)側髁后用手術刀片在其內(nèi)側髁正中部位制造大小約2×3mm、厚度約0.3mm的軟骨缺損，然后，右膝關節(jié)腔內(nèi)注入之前制備的0.5mlPRP及50ul激活劑（葡萄糖酸鈣、牛凝血酶）左膝不予其他干預處理。術后實驗動物均不予以制動。
　　 6、觀察結果:空氣栓塞法處死實驗動物后切開關節(jié)囊暴露軟骨損傷部位進行大體觀

6、察并應用國際軟骨修復協(xié)會(InternationalCartilageRepairSocietyICRS)對其進行大體評價，之后對損傷修復部位進行取材制成組織切片并行HE和番紅-O染色，對其進行顯微鏡下觀察并應用奧德里斯科爾組織學評分(O'Driscollhistologicalscore)對其進行評價。
　　 結果:在1周時實驗組與對照組已有顯著差異，實驗組已可觀察到軟骨損傷區(qū)表面有一層薄膜樣組織生成，番紅-O染色后顯微鏡下觀

7、察可見實驗組軟骨損傷處有大量軟骨細胞增生聚集，但并無軟骨基質(zhì)形成，而對照組新生的細胞大部分為成纖維細胞;在3周時肉眼觀察實驗組與對照組軟骨缺損區(qū)可發(fā)現(xiàn)實驗組修復程度顯著優(yōu)于對照組，顯微鏡下觀察結果也顯示實驗組已有大量番紅-O著色的軟骨基質(zhì)，軟骨細胞增殖旺盛，而對照組則缺乏軟骨基質(zhì)產(chǎn)生，新生的細胞多為成纖維細胞。在5周時大體觀察可見實驗組軟骨缺損區(qū)已經(jīng)完全修復，幾乎看不到軟骨損傷痕跡，而對照組軟骨缺損仍然明顯，相比較與3周組的軟骨缺損修復

8、程度沒有明顯提高，在顯微鏡下觀察見實驗組新生組織與正常軟骨組織從細胞形態(tài)、細胞分布及細胞外基質(zhì)分布方面都沒有明顯區(qū)別，對照組則仍然幾乎沒有軟骨基質(zhì)形成。
　　 統(tǒng)計學分析均應用秩和檢驗，大體觀察評分結果顯示1周組中實驗組與對照組對比Z=-2.220,P=0.026(＜0.05)，3周組中實驗組與對照組對比Z=-2.214，P=0.027(＜0.05)，5周組中實驗組與對照組對比Z=-2.333,P=0.020＜0.05)，差異均

9、有統(tǒng)計學意義;顯微鏡下觀察評分結果顯示1周組中實驗組與對照組對比Z=-2.460,P=0.014(＜0.05)，3周組中實驗組與對照組對比Z=-2.530,P=0.011＜0.05)，5周組中實驗組與對照組對比Z=-2.646,P=0.008(＜0.05)，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:通過本實驗我們認為:關節(jié)軟骨損傷后自身修復緩慢，并且新生組織為纖維軟骨，PRP可促進關節(jié)軟骨損傷后的修復速度，并且能刺激軟骨細胞再生基質(zhì)形成