富血小板血漿復(fù)合脂肪干細(xì)胞修復(fù)兔肌腱病變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:怎樣有效的治療肌腱疾病仍然是我們臨床工作所面臨的難題，脂肪來(lái)源干細(xì)胞(ADSCs)在不同的誘導(dǎo)條件下可具有多向分化成其它組織細(xì)胞的能力，因此ADSCs可作為修復(fù)細(xì)胞為其提供了新的治療方法，但ADSCs在臨床上用于治療肌腱疾病的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本課題通過(guò)構(gòu)建間接共培養(yǎng)模式，在體外觀察并檢測(cè)兔ADSCs與兔肌腱細(xì)胞間的特征變化，為ADSCs在肌腱病治療中的干細(xì)胞臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。實(shí)驗(yàn)中還設(shè)置富血小板血漿(PRP)干預(yù)組對(duì)

2、照研究不同間接共培養(yǎng)環(huán)境對(duì)ADSCs分化誘導(dǎo)的機(jī)制。
　　 方法:采集新西蘭大白兔肌腱組織并采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)從兔脂肪組織中分離并培養(yǎng)ADSCs。采集兔耳部血液制備PRP，并將其激活后待用。選用孔徑為0.4(u)m的細(xì)胞共培養(yǎng)嵌盒和6孔板來(lái)構(gòu)建間接共培養(yǎng)模式，使得培養(yǎng)液相通但細(xì)胞卻不能直接接觸。將形態(tài)良好狀況穩(wěn)定的第3代(P3)兔肌腱細(xì)胞和兔ADSCs(P3)細(xì)胞應(yīng)用于此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?。將同體肌腱細(xì)胞種植于內(nèi)室，將實(shí)驗(yàn)組A

3、DSCs接種于間接共培養(yǎng)體系外室，與此同時(shí)設(shè)置肌腱細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組、干細(xì)胞對(duì)照組以及ADSCs加一定濃度PRP的干預(yù)組。分別在共培養(yǎng)后第3、7、14天時(shí)，提取內(nèi)、外室細(xì)胞進(jìn)行觀察及相關(guān)檢測(cè)。分別利用光學(xué)顯微鏡和免疫組化染色技術(shù)，進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和蛋白層面的檢測(cè)分析。統(tǒng)計(jì)MOD數(shù)據(jù)并計(jì)算Ⅰ型膠原和腱調(diào)蛋白(TNMD)在蛋白層面的表達(dá)情況，根據(jù)檢測(cè)的結(jié)果分析間接共培養(yǎng)環(huán)境對(duì)ADSCs誘導(dǎo)分化與細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)產(chǎn)生的影響。應(yīng)用前列腺素E2方法建

4、立肌腱病模型，并將復(fù)合PRP的兔ADSCs進(jìn)行在體肌腱病模型部位處回植后觀察檢測(cè)并分析修復(fù)效果。
　　 結(jié)果:在體外成功分離、培養(yǎng)并檢測(cè)、鑒定兔脂肪干細(xì)胞及兔肌腱細(xì)胞特征。在共培養(yǎng)3天時(shí)，檢測(cè)內(nèi)外室細(xì)胞，各組ADSCs在免疫組化染色檢測(cè)中均未出現(xiàn)Ⅰ型膠原與腱調(diào)蛋白(TNMD)的陽(yáng)性表達(dá)。在第7天時(shí)，單純間接共培養(yǎng)組的以上兩種蛋白在免疫組化染色方面顯示部分細(xì)胞出現(xiàn)弱陽(yáng)性染色，其與PRP干預(yù)組之間比較無(wú)明顯差別。在第14天時(shí)，檢測(cè)結(jié)

5、果顯示單純組的干細(xì)胞在以上兩種蛋白的免疫組化染色呈現(xiàn)廣泛弱陽(yáng)性染色，而PRP干預(yù)組呈更強(qiáng)程度的弱陽(yáng)性染色。將各組的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單純組干細(xì)胞的兩種蛋白表達(dá)程度顯著高于陰性的干細(xì)胞對(duì)照組但較肌腱細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照組表達(dá)弱。另外，PRP干預(yù)組的表達(dá)情況優(yōu)于單純干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組。將富血小板血漿復(fù)合ADSCs回植前列腺素E2-肌腱病模型，觀察并分析修復(fù)效果，其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、相關(guān)指標(biāo)顯示實(shí)驗(yàn)組肌腱病模型部位的修復(fù)效果優(yōu)于對(duì)照組。
　　 結(jié)