基于脂質(zhì)組學(xué)的PCB153和PCB95對PC12細胞聯(lián)合毒性效應(yīng)研究.pdf

1、多氯聯(lián)苯(PCBs)作為一種廣泛存在的持久性有機污染物，能夠?qū)ι锏纳诚到y(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等造成不同程度的影響，這些影響通過食物鏈被逐漸富集，給人類健康帶來巨大威脅。環(huán)境中的PCBs往往并不是以某種單一的形式存在，而是復(fù)合暴露。因此，研究不同多氯聯(lián)苯的混合污染帶來的聯(lián)合毒性效應(yīng)具有很重要的意義。隨著科學(xué)技術(shù)水平的進步，脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)運而生，通過脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)揭示污染物的毒性作用為更廣泛地研究其作用機理提供了嶄新的思路和方法。

2、>　　鑒于未來毒性測試的重點將由整體動物試驗轉(zhuǎn)向基于細胞等動物替代方法的測試策略，本論文以PC12細胞為研究對象，開展PCB153和PCB95單獨及聯(lián)合暴露實驗，并通過脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析其對PC12細胞內(nèi)源性甘油磷脂產(chǎn)生的影響，從而在細胞層面探討PCB153和PCB95單獨及聯(lián)合暴露產(chǎn)生的神經(jīng)毒性作用。
　　本研究首先建立了26種甘油磷脂在HepG2細胞和PC12細胞中的檢測方法，其中22種甘油磷脂為兩種細胞的內(nèi)源性脂質(zhì)。對于外源性

3、甘油磷脂在PC12細胞中進行添加回收實驗，添加濃度在25μg/L-1000μg/L之間時，回收率在737％-1172％之間，證明了方法的準(zhǔn)確性。采用PC12細胞進行重復(fù)性試驗(n=12)，測得各脂質(zhì)化合物含量變化RSD均小于20％，說明了方法重現(xiàn)性良好。該方法為細胞中部分甘油磷脂的檢測提供了技術(shù)依據(jù)，也為后續(xù)靶向脂質(zhì)組學(xué)研究提供了基礎(chǔ)。
　　開展了PC12細胞在PCB153和PCB95分別為014μM，139μM，5540μM和0

4、1μM，2μM，10μM三個劑量下的細胞活性實驗，暴露時間至120h。其中，不同劑量PCB153暴露期間，細胞活性在4686％-15074％之間;不同劑量PCB95暴露期間，細胞活性在6443％-10021％之間。以上述三個劑量的PCB153和PCB95對PC12細胞開展脂質(zhì)組學(xué)研究，暴露時間至120h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCB153暴露PC12細胞至120h時，低、高劑量組中甘油磷脂呈現(xiàn)出相似的上調(diào)趨勢，而中劑量組呈現(xiàn)出相反的變化趨勢;暴露P

5、CB95至120h時，低、中劑量組變化趨勢相似，高劑量組變化更為劇烈，并分別有2、2、7種甘油磷脂發(fā)生顯著上調(diào)。根據(jù)變量中VIP值＞1，結(jié)合t-testP值＜005，篩選得到PC12細胞暴露不同劑量PCB153至120h時的差異代謝物為PC(140/140)，PE(16.0/181)，PE(16.0/182)，PS(180/181)以及PI(16.0/181)，暴露不同劑量PCB95至120h時的差異代謝物僅有PC(140/140)。<

6、br>　　以PCB153和PCB95所確定的的最高劑量單獨及聯(lián)合暴露PC12細胞至24h后進行細胞活性實驗，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合暴露組的細胞活性高于PCB153組，低于PCB95組。聯(lián)合暴露組中甘油磷脂波動范圍較單獨暴露更加廣泛，篩選得到差異代謝物PC(140/140)和PS(180/181)。此外，還建立了以甘油磷脂的兩條脂肪酸鏈為特征碎片，結(jié)合母離子構(gòu)建MRM信息對PC12細胞中未知甘油磷脂進行初步篩選的方法，初步篩選出PC12細胞中的62種甘