利福平抑制mpp39;所致pc12細(xì)胞神經(jīng)毒性作用的研究

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文利福平抑制M P P + 所致P C I 2 細(xì)胞神經(jīng)毒性作用的研究I n h i b i t i o ne f f e c to f R i f a m p i c i n o n1 - m e t h y l - 4 - p h e n y l p y r i d i n i u m．i n d u c e d n e u r o t o x i c i t y i n P C I 2 c e l l s申請(qǐng)人：

2、李波導(dǎo) 師：陶恩祥教授專業(yè)名稱：神經(jīng)內(nèi)科研究方向：帕金森病答辯委員會(huì)主席：答辯委員會(huì)委員：中L L I 大學(xué)附屬第二醫(yī)院中國(guó) 廣州2 0 0 7 年粥 { ≥移 叫蟲 枷№ 廁場(chǎng)㈨ } 黽繹內(nèi)科＼U 、f◇! ．曼、生童 利福平抑制M P P + 所致P C I 2 細(xì)胞神經(jīng)毒性作用的研究森病有沒(méi)有作用，如果有，它是通過(guò)怎樣的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的，目前關(guān)于這方面的報(bào)道尚少。本實(shí)驗(yàn)用M P P + 誘導(dǎo)P C I 2 細(xì)胞建立帕金森細(xì)胞模型，已經(jīng)

3、證實(shí)利福平具有降低M P P + 誘導(dǎo)的P C I 2 細(xì)胞凋亡率及抑制細(xì)胞內(nèi)。一s y n u c l e i n 表達(dá)量的作用。奉課題是在這一研究結(jié)果的基石；l } 上，繼續(xù)探討利福平對(duì)M P P ‘誘導(dǎo)的P C I 2 細(xì)胞神經(jīng)毒性作用的抑制作用及其作用的途徑。二、研究目的通過(guò)M P P + 誘導(dǎo)P C I 2 細(xì)胞建立帕金森細(xì)胞模型，1 i 同濃度利福平干預(yù)后，觀察各處理組細(xì)胞凋亡率、凋亡形態(tài)學(xué)及n —s y n u c l e

4、 i n 表達(dá)量的變化，證實(shí)利福平是否具有抑制M P P + 所致的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。并進(jìn)一步觀察利福平作用后，各組細(xì)胞中c a s p a s e 一：j 激活率、線粒體結(jié)構(gòu)變化及A T P 表達(dá)量的變化，探討利福平抑制細(xì)胞毒性作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。三、實(shí)驗(yàn)對(duì)象1 ．細(xì)胞株P(guān) C I 2 ：大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株。2 ．細(xì)胞培養(yǎng)、凋亡誘導(dǎo)及干預(yù)分組P C I 2 細(xì)胞置于D M E M ／F 1 2 培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每隔4 8

5、 h 換培養(yǎng)液，當(dāng)單層培養(yǎng)細(xì)胞匯合以后，傳代培養(yǎng)。將P C I 2 細(xì)胞傳入培養(yǎng)板中，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后加藥，加入不同劑量的利福平，利福平溶解于甲醇中，使終濃度分別達(dá)到0 、1 0 0 、2 0 0 、3 0 0 um o l ／L ，2 h 后分別加入M P P + ，終濃度為l m m o l ／L ，繼續(xù)培養(yǎng)4 8 h ，即可進(jìn)行結(jié)果檢測(cè)。以上劑量及處理用于所有實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為6 個(gè)組：( 1 ) l F 常對(duì)照組； ( 2 )

6、 O um o l ／L 利槲平& M P P l ( M P P + 組) ； ( 3 )1 ( ) o ut o o | ／W 。利福平& h 4 P P + ；( 4 ) 2 0 0 I JI l l ( ) 1 ／I ，利福平& M P P + ；( 5 ) 3 0 0 um 0 1 ／I ，利福平& ＼I I P P ’； ( 6 ) 等體積甲醇& 、I I P P + 組六組。A T

7、P 活性檢測(cè)分1 0 組，分別為：( 1 ) 正常對(duì)照組； ( 2 ) Oum o l ／L 利福甲& M P P +( M P P + 組) ；( 3 ) 1 0 0 u m o l ／L 利福平＆M P P ‘；( 4 ) 2 0 0 1 1m o l ／L 利福平＆M P P f ； ( 5 )3 0 0 um o l ／I 。利福平& M P P ’； ( 6 ) 等體積甲醇& M P P + 組；( 7