NGF對黏菌素致PC12細(xì)胞自噬和凋亡的影響研究.pdf

1、黏菌素(colistin)是多黏菌素類抗菌劑的一種，是對抗多重耐藥性綠膿桿菌和鮑曼不動桿菌引發(fā)感染有效手段。然而黏菌素的神經(jīng)毒性與腎毒性妨礙了它在臨床上的應(yīng)用，隨著革蘭氏陰性菌耐藥性增強(qiáng)，黏菌素作為窄譜抗生素在抗菌方面的優(yōu)勢逐步體現(xiàn)出來。降低黏菌素的毒副作用，有助于黏菌素在臨床上的應(yīng)用。神經(jīng)生長因子(NFG)是神經(jīng)營養(yǎng)因子(NT)的一種，能夠在神經(jīng)元受到損傷時(shí)起到保護(hù)神經(jīng)元的作用，增強(qiáng)神經(jīng)元的活性。細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡在細(xì)胞的正常生理活動

2、中有重要作用。細(xì)胞通過自噬可以消化細(xì)胞內(nèi)的長壽命蛋白以及細(xì)胞器。當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)也可以激活細(xì)胞自噬，例如缺乏氨基酸或者是細(xì)胞生理刺激等。本試驗(yàn)以NGF作為黏菌素毒副作用的保護(hù)劑與黏菌素共同作用于大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)，探究NGF對細(xì)胞活性的保護(hù)作用以及細(xì)胞自噬在細(xì)胞凋亡中的作用。
　　在之前的研究中我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PC12細(xì)胞在接種125、250μg·mL-1 colistin12 h時(shí)，細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡的程度比較高，并且從we

3、stern blot試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的Caspase-3蛋白含量在與colistin接觸24 h時(shí)最高。在250μg·mL-1 colistin濃度組中隨著自噬程度的增加，細(xì)胞凋亡越明顯，最終確定黏菌素的濃度為250μg·mL-1。PC12細(xì)胞在終濃度分別為NGF(25、50、100 ng·mL-1)和250μg·mL-1 colistin共同作用12，24h。細(xì)胞自噬可以通過單丹磺酰尸胺(MDC)方法觀察細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡，LC3免疫熒光

4、顯微鏡觀測細(xì)胞熒光顆粒和蛋白免疫印跡(western blot)測定細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白。細(xì)胞凋亡可以通過Hoechst33258染色染色細(xì)胞核、流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞活力和細(xì)胞線粒體膜電位、及western blot測定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白等方法檢測。試驗(yàn)結(jié)果表明:
　　(1)黏菌素能夠引起PC12細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡，250μg·mL-1 colistin與細(xì)胞作用24 h時(shí)凋亡率最高，作用12h組時(shí)細(xì)胞自噬程度最高。
　　(2)隨著

5、NGF濃度的增加，試驗(yàn)組的PC12細(xì)胞活性提高。
　　(3)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin1的表達(dá)量以及細(xì)胞凋亡率隨NGF濃度的增加均有所下降。
　　(4)不同濃度的NGF與250μg·mL-1 colistin接觸12，24 h，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量也有所下降。
　　綜上所述，NGF可以提高PC12細(xì)胞的細(xì)胞活性;高濃度的colistin引起的PC12細(xì)胞的自噬可能對細(xì)胞凋亡