基于固定化酶檢測接口的毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、隨著生命科學(xué)、臨床藥學(xué)的發(fā)展，藥物分析在分析科學(xué)中越來越重要。復(fù)雜生物樣品中痕量生物大分子和藥物的分析一直是困擾分析工作者的難題。毛細(xì)管電泳具有高效、快速、消耗量低等優(yōu)點，已成為近年來分析化學(xué)最活躍的研究方向之一。從技術(shù)水平來說，毛細(xì)管電泳已經(jīng)發(fā)展為不同的分離模式，從而滿足不同性質(zhì)樣品在管內(nèi)的最佳分離。毛細(xì)管的樣品分離量在納升級，非常適用于微量生物樣品的分析，但同時也對檢測的靈敏度提出了更高的要求。雖然激光誘導(dǎo)熒光，質(zhì)譜等檢測技術(shù)滿足了

2、毛細(xì)管電泳檢測的要求，但是昂貴的儀器價格和復(fù)雜的檢測程序限制了它們的應(yīng)用范圍。將具有獨特高催化效率的酶反應(yīng)應(yīng)用到毛細(xì)管電泳中放大檢測信號提高靈敏度已受到關(guān)注。化學(xué)發(fā)光檢測是一種在暗背景下實現(xiàn)對光信號的高靈敏捕捉，不僅不需要外加光源使得儀器設(shè)備簡單廉價，而且避免了光源的不穩(wěn)定以及瑞利散射和拉曼散射引起的背景噪音。酶催化的化學(xué)發(fā)光檢測具有操作簡單、高靈敏等特點非常適合與毛細(xì)管電泳聯(lián)用。
　　 本論文主要設(shè)計了一種新穎的固定化酶流通接

3、口用于毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光檢測。各項研究工作簡述如下:
　　 (1)設(shè)計一種基于固定化酶的毛細(xì)管電泳柱后檢測接口
　　 本實驗將具有獨特高催化效率的酶反應(yīng)應(yīng)用到毛細(xì)管電泳中，設(shè)計了一種新穎的固定化酶檢測接口，用以放大檢測信號提高靈敏度。利用共價鍵和作用，將辣根過氧化物酶固定于醛基紙膜上，在流通池中催化魯米諾-過氧化氫-溴酚藍(lán)化學(xué)發(fā)光體系。自行設(shè)計的固定化酶發(fā)光流通池，能使酶及時催化過氧化氫產(chǎn)生活性氧，與毛細(xì)管中分離的魯米諾

4、發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。以魯米諾為分析物檢測所設(shè)計接口的性能，在最優(yōu)的實驗條件下，魯米諾在0.1-300μM范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強度呈良好的線性關(guān)系，峰高和遷移時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別低于7.5％和8.2％，在連續(xù)重復(fù)50次進(jìn)樣后，檢測信號保持較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
　　 (2)基于固定化酶檢測接口的開管毛細(xì)管電色譜-化學(xué)發(fā)光檢測生物胺
　　 本實驗將接有巰基的β-環(huán)糊精(β-CD-SH)做為活性基團(tuán)，納米金作為支撐，先合成β-CD

5、-SH修飾的納米金，再將這種修飾了的納米金作為固定相涂布于毛細(xì)管內(nèi)壁中制作開管毛細(xì)管電色譜柱。本實驗組延續(xù)使用了前面工作中設(shè)計的固定化酶檢測接口和魯米諾-過氧化氫-溴酚藍(lán)化學(xué)發(fā)光體系，采用三乙胺高效催化生物胺與N-(4-氨基丁基)-N-乙基異魯米諾的衍生反應(yīng)，再通過開管毛細(xì)管電色譜-化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分離分析檢測。在最優(yōu)的實驗條件下，Gly在0.5-200μM范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強度呈良好的線性關(guān)系，甘氨酸的檢測限(S/N=3)能達(dá)到0.