毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測生物活性物質(zhì).pdf

1、第一章,首先對毛細管電泳技術(shù)的發(fā)展及現(xiàn)狀進行了簡單的介紹,然后對毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用進行了敘述,并且對毛細管電泳有關(guān)高通量單細胞分析技術(shù)(包括單細胞分析技術(shù)、高通量單細胞檢測)方面的研究進行了概括。
　　 第二章,本實驗采用毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光的方法,對谷胱甘肽(GSH)、抗壞血酸(AA)和多巴胺(DA)進行了分離檢測。為了獲得GSH、AA和DA三種物質(zhì)的最佳分離檢測條件,考察了運行緩沖液種類、pH值、濃度、分離

2、電壓,檢測電勢及Ru(bpy)32+濃度的影響,確定了最佳分離檢測條件為:pH7.8,濃度為50mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液,分離電壓為15 kV,Ru(bpy)32+的濃度為2.0×10-3mol·L-1,檢測電位為1.3 V,在12 kV下電遷移進樣10 s。在優(yōu)化條件下,三種物質(zhì)的檢測限(S/N=3)分別為:谷胱甘肽1.0×10-6mol·L-1,抗壞血酸1.0×10-6mol·L-1和多巴5.0×10-

3、7 mol·L-1。采用1.0×10-5 mol·L-1DA、5.0×10-4mol·L-1 GSH和1.0×10-5 mol·L-1AA混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進樣6次,電化學(xué)發(fā)光峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為3.3％、2.2%和3.1%,遷移時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.1%、0.98%和1.2%。并且對人血血紅細胞溶膜液中的谷胱甘肽、抗壞血酸和多巴胺進行了分離,加標(biāo)回收率分別為96%、105%和103%。
　　 第三章

4、,采用毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測的方法,對香草扁桃酸(VMA)和高香草酸(HVA)進行分離檢測,實驗中對于緩沖液種類、pH值及濃度大小、分離電壓、檢測電勢、及Ru(bpy)32+的濃度進行了考察。我們確定了對兩種物質(zhì)的分離檢測最優(yōu)條件:pH8.250 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液,檢測電勢1.2 V,分離電壓為16 kV,Ru(bpy)32+的濃度為5 mmolL-1。在10 kV下電遷移進樣10 s。在以上優(yōu)化

5、條件下,兩種物質(zhì)的檢測限(S/N=3)分別為:VMA5.0×10-7 mol·L-1,HVA6.1×10-7 mol·L-1。將VMA(1.0×10-5 mol·L-1)和HVA(1.0×10-5 mol·L-1)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進樣檢測6次,得到電化學(xué)發(fā)光強度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.7%和3.1%,遷移時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.1%和0.9%。并對尿樣中VNA和HVA進行了檢測,加標(biāo)回收率分別為98%和99%。<

6、br>　　 第四章,自制了高通量單細胞計數(shù)裝置,采用壓力控制細胞進樣,實驗操作簡單計數(shù)過程快捷。采用pH7.8濃度為20 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液作為流通介質(zhì),Ru(bpy)32+濃度為5.0×10-3 mol·L-1作為檢測條件,檢測電位為1.3 V,進樣壓力為0.6 Mpa,對人血血紅細胞采用電化學(xué)發(fā)光檢測進行了計數(shù),單細胞的計數(shù)間隔約為20 s,細胞計數(shù)的發(fā)光強度與顯微鏡下觀察到的細胞流通情況相一致