毛細(xì)管電泳和化學(xué)發(fā)光法實時、在體檢測藥物及金屬離子.pdf

1、近幾年來，微透析技術(shù)在藥物代謝動力學(xué)領(lǐng)域，尤其是在藥物分布與代謝的研究方面開始發(fā)揮重要作用。微透析取樣可以與許多檢測技術(shù)聯(lián)用，其中，微透析技術(shù)與高效液相色譜聯(lián)用較多，但液相色譜存在需要的樣品量多，分析時間長，得到的時間分辨率低，成本較高等缺點，使其應(yīng)用受到一定的限制。毛細(xì)管電泳是一類新型液相分離分析技術(shù)，它具有分辨率高、分離速度快、所需樣品量少、樣品處理相對簡便的優(yōu)點，為與微透析技術(shù)聯(lián)用提供了理想的條件。流動注射化學(xué)發(fā)光分析法具有很高的

2、靈敏度，很寬的線性范圍，分析速度快，同時儀器設(shè)備又很簡單、廉價、易微型化，有廣泛的應(yīng)用前景。 目的：(1)將毛細(xì)管電泳與微透析采樣技術(shù)聯(lián)用，測定家兔血液中游離的藥物濃度；(2)將流動注射化學(xué)發(fā)光法與微透析采樣技術(shù)聯(lián)用，測定家兔血液中游離的金屬離子濃度。 方法：(1)首先對毛細(xì)管電泳條件(包括緩沖液的種類、pH值和離子強度，進樣方式和進樣量，運行電壓)進行優(yōu)化，建立被測藥物與內(nèi)標(biāo)物的最佳分離條件；測定毛細(xì)管電泳的精密度和回

3、收率，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后對微透析系統(tǒng)(灌流液的種類，灌流速度)進行優(yōu)化，測定透析率。最后，通過家兔耳緣靜脈注射藥物，用微透析探針采樣，通過毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離測定透析液中的藥物，實時、在體的測定藥物在家兔血液中的代謝過程。 (2)首先優(yōu)化化學(xué)發(fā)光條件(包括化學(xué)發(fā)光體系的選擇，魯米諾溶液的pH和濃度、過氧化氫的濃度、EDTA的濃度、試液流速、陰離子交換柱長度)，建立檢測三價鉻的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)；測定精密度和回收率，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后對微

4、透析系統(tǒng)(灌流液的種類，灌流速度)進行優(yōu)化，測定透析率。最后，給家兔灌胃CrCl3·6H2O，用微透析探針采樣，通過Luminol-H2O2-Cr(Ⅲ)發(fā)光體系測定透析液中金屬離子，實時、在體的測定游離三價鉻在家兔血液中的代謝過程。 結(jié)果：(1)通過對毛細(xì)管區(qū)帶電泳條件的優(yōu)化，能夠使被測藥物與內(nèi)標(biāo)達到基線分離，而且內(nèi)源性物質(zhì)不干擾檢測，成功地測定了藥物西咪替丁和雷尼替丁在家兔血液中的代謝過程。(2)用建立的微透析-化學(xué)發(fā)光檢測系

5、統(tǒng)，成功地測定了家兔血液中游離三價鉻的代謝過程。 結(jié)論：上述結(jié)果提示：(1)用毛細(xì)管電泳-微透析系統(tǒng)能夠?qū)崟r、在線地測定藥物在家兔血液中的代謝。由于毛細(xì)管電泳所具有的分辨率高、分離速度快、所需樣品量少等優(yōu)點，該系統(tǒng)可以廣泛的應(yīng)用于藥物代謝動力學(xué)研究，尤其適合于半衰期較短的藥物。(2)將流動注射化學(xué)發(fā)光分析與微透析聯(lián)用，能夠排除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，實時、在線地測定金屬離子在家兔血液中的濃度。微透析-流動注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)分析速度快