毛細(xì)管電泳和化學(xué)發(fā)光法實(shí)時(shí)、在體檢測(cè)藥物及金屬離子.pdf

1、近幾年來(lái)，微透析技術(shù)在藥物代謝動(dòng)力學(xué)領(lǐng)域，尤其是在藥物分布與代謝的研究方面開(kāi)始發(fā)揮重要作用。微透析取樣可以與許多檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，其中，微透析技術(shù)與高效液相色譜聯(lián)用較多，但液相色譜存在需要的樣品量多，分析時(shí)間長(zhǎng)，得到的時(shí)間分辨率低，成本較高等缺點(diǎn)，使其應(yīng)用受到一定的限制。毛細(xì)管電泳是一類(lèi)新型液相分離分析技術(shù)，它具有分辨率高、分離速度快、所需樣品量少、樣品處理相對(duì)簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，為與微透析技術(shù)聯(lián)用提供了理想的條件。流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法具有很高的

2、靈敏度，很寬的線性范圍，分析速度快，同時(shí)儀器設(shè)備又很簡(jiǎn)單、廉價(jià)、易微型化，有廣泛的應(yīng)用前景。 目的：(1)將毛細(xì)管電泳與微透析采樣技術(shù)聯(lián)用，測(cè)定家兔血液中游離的藥物濃度；(2)將流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法與微透析采樣技術(shù)聯(lián)用，測(cè)定家兔血液中游離的金屬離子濃度。 方法：(1)首先對(duì)毛細(xì)管電泳條件(包括緩沖液的種類(lèi)、pH值和離子強(qiáng)度，進(jìn)樣方式和進(jìn)樣量，運(yùn)行電壓)進(jìn)行優(yōu)化，建立被測(cè)藥物與內(nèi)標(biāo)物的最佳分離條件；測(cè)定毛細(xì)管電泳的精密度和回

3、收率，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后對(duì)微透析系統(tǒng)(灌流液的種類(lèi)，灌流速度)進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定透析率。最后，通過(guò)家兔耳緣靜脈注射藥物，用微透析探針采樣，通過(guò)毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離測(cè)定透析液中的藥物，實(shí)時(shí)、在體的測(cè)定藥物在家兔血液中的代謝過(guò)程。 (2)首先優(yōu)化化學(xué)發(fā)光條件(包括化學(xué)發(fā)光體系的選擇，魯米諾溶液的pH和濃度、過(guò)氧化氫的濃度、EDTA的濃度、試液流速、陰離子交換柱長(zhǎng)度)，建立檢測(cè)三價(jià)鉻的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)；測(cè)定精密度和回收率，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后對(duì)微

4、透析系統(tǒng)(灌流液的種類(lèi)，灌流速度)進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定透析率。最后，給家兔灌胃CrCl3·6H2O，用微透析探針采樣，通過(guò)Luminol-H2O2-Cr(Ⅲ)發(fā)光體系測(cè)定透析液中金屬離子，實(shí)時(shí)、在體的測(cè)定游離三價(jià)鉻在家兔血液中的代謝過(guò)程。 結(jié)果：(1)通過(guò)對(duì)毛細(xì)管區(qū)帶電泳條件的優(yōu)化，能夠使被測(cè)藥物與內(nèi)標(biāo)達(dá)到基線分離，而且內(nèi)源性物質(zhì)不干擾檢測(cè)，成功地測(cè)定了藥物西咪替丁和雷尼替丁在家兔血液中的代謝過(guò)程。(2)用建立的微透析-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系

5、統(tǒng)，成功地測(cè)定了家兔血液中游離三價(jià)鉻的代謝過(guò)程。 結(jié)論：上述結(jié)果提示：(1)用毛細(xì)管電泳-微透析系統(tǒng)能夠?qū)崟r(shí)、在線地測(cè)定藥物在家兔血液中的代謝。由于毛細(xì)管電泳所具有的分辨率高、分離速度快、所需樣品量少等優(yōu)點(diǎn)，該系統(tǒng)可以廣泛的應(yīng)用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，尤其適合于半衰期較短的藥物。(2)將流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析與微透析聯(lián)用，能夠排除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，實(shí)時(shí)、在線地測(cè)定金屬離子在家兔血液中的濃度。微透析-流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)分析速度快