轉(zhuǎn)基因克隆兔的相關(guān)研究.pdf

1、供體細胞在體外培養(yǎng)的時間和培養(yǎng)代數(shù)對體細胞核移植效率有重要影響。本研究通過對5-10低代數(shù)組和20-25高代數(shù)組的兔成纖維細胞進行核移植研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩個實驗組供體細胞之間的核移植的效率存有差異。通過對供體細胞進行核移植后的重構(gòu)胚胎的融合率、卵裂率、囊胚率以及體內(nèi)發(fā)育的比較，發(fā)現(xiàn)低代數(shù)相對來說效率較高，但是高代數(shù)組也能獲得正常的克隆后代。本研究驗證了兔不同代數(shù)體外培養(yǎng)細胞對克隆效率的影響，為制備基因打靶兔提供了理論依據(jù)和時間窗口。

2、>　　 體細胞核移植已經(jīng)成為制備轉(zhuǎn)基因動物的常用技術(shù)，體細胞的轉(zhuǎn)染效率已經(jīng)成為制約轉(zhuǎn)基因效率的重要因素。本實驗通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的成纖維細胞，轉(zhuǎn)染后按1:40和1:80兩個密度進行稀釋，生長至30％-40%匯合度時加入G418進行篩選，最終共獲得細胞克隆41個，其中綠色熒光蛋白(GFP)陽性細胞克隆12個，兩種稀釋密度均可獲得單細胞長滿形成的GFP克隆，但低密度的效率更高，1:80可作為細胞篩選的適合密度。實驗獲得的結(jié)果為提高細胞

3、轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)基因動物制作的成功率提供了參考。
　　 胚胎冷凍保存已經(jīng)成為動物保種，實驗動物胚胎運輸?shù)囊粋€必不可少的有效工具。玻璃化冷凍是一種快速冷凍方法，不需要特殊的設(shè)備。本研究將篩選出帶有綠色熒光的胚胎應(yīng)用玻璃化方法進行冷凍并將非綠色熒光的胚胎篩選出來后也進行玻璃化冷凍。將冷凍復(fù)蘇后形態(tài)完整的胚胎進行體外培養(yǎng)，有47%的非GFP胚胎發(fā)育至囊胚。將復(fù)蘇的GFP轉(zhuǎn)基因桑椹胚移植到受體代孕母兔體內(nèi)，21%的胚胎發(fā)育為胎兒。最終，通過