楊樹擴張蛋白PtEXP1基因的克隆及其轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、木材形成是一個復雜的生物學過程，是維管形成層生長和分化出次生組織的結果。研究維管木質(zhì)部發(fā)育的分子基礎，即找出木材形成過程的關鍵調(diào)控基因，進而有目的改變這些基因的表達，對提高林木的生長速率，改良林木的木材性狀具有重要意義。 擴張蛋白(expansin)是一種已經(jīng)確定的細胞壁松弛因子，具有伸展細胞壁、促進細胞分化的功能。為探討擴張蛋白在木材形成中的功能、表達調(diào)控、作用機制及其在基因工程遺傳改良中的應用前景，從而為進一步研究基因工程改

2、良樹木材性提供理論基礎和基因資源。本文以毛白楊形成層區(qū)域擴張蛋白PtEXP1基因為研究對象，開展了擴張蛋白的基因工程研究工作，主要取得以下研究成果： 1.以毛白楊(PopulustomentosaCarr.)為材料，利用RT-PCR法從樹干形成層區(qū)域中成功克隆出可能與木質(zhì)部細胞分化相關的基因PtEXP1的全長cDNA片段，并成功將該片段連接到pGEM-T載體中。 2.利用雙元植物表達載體PBI121，將基因PtEXP1的

3、全長cDNA片段776bp正向插入載體CaMV35S啟動子后，構建了該基因的正義植物表達載體PBI121-PtEXP1，并成功轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌GV3101中。 3.應用在銀腺楊(P.alba×P.glandulossa)84K上建立的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系，通過農(nóng)桿菌介導的葉盤法進行了PtEXP1基因的遺傳轉(zhuǎn)化，并獲得了經(jīng)抗Kan抗性生根篩選的正義表達PtEXP1基因的轉(zhuǎn)基因植株。 4.利用PCR擴增檢測經(jīng)抗Kan抗性生根初步篩