miR-130b通過(guò)PI3K-Akt信號(hào)通路靶向調(diào)控PTEN在乳腺癌多藥耐藥中的研究.pdf

1、目的：通過(guò)研究miR-130b和PTEN在乳腺癌組織及細(xì)胞株中的差異表達(dá)，闡明 miR-130b靶向P TEN通過(guò)PI3K/Ak t信號(hào)通路調(diào)控乳腺癌多藥耐藥性及增殖的功能機(jī)制，為乳腺癌治療提供新的策略。
　　方法：
　　(1)通過(guò)qRT–PCR檢測(cè)miR-130b和PTEN在乳腺癌組織（乳腺癌組織和癌旁正常組織）及細(xì)胞株（人乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7和人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/ADR）中的差異表達(dá)。
　　(2)

2、特異性上調(diào)MCF-7細(xì)胞中的miR-130b、下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b，采用real-time PCR、Western Blot、免疫熒光技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)、干擾前后MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞中P TEN的表達(dá)情況。
　　(3)采用生物信息學(xué)技術(shù)及雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 miR-130b與PTEN的靶向關(guān)系。
　　(4)采用CCK8、克隆形成、流式細(xì)胞技術(shù)、免疫熒光、體內(nèi)成瘤及免疫組化技術(shù)驗(yàn)證miR-1

3、30b過(guò)表達(dá)及干擾后，乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)、外對(duì)藥物敏感性及增殖的變化。
　　(5)特異性上調(diào)MCF-7中miR-130b和PTEN，下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b和PTEN，檢測(cè)共轉(zhuǎn)染后MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞中PTEN-PI3K/Akt信號(hào)通路的變化及在體外對(duì)藥物敏感性和增殖的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) miR-130b在人乳腺癌組織及耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR中的表達(dá)明顯高于乳腺癌癌旁正常

4、乳腺組織及乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7中的表達(dá)，且 miR-130b和 P TEN表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　(2)特異性上調(diào) MCF-7細(xì)胞中 miR-130b，PTEN表達(dá)下降；特異性下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b，P TEN表達(dá)增加。
　　(3) PTEN是miR-130b的靶基因。
　　(4)特異性上調(diào)MCF-7細(xì)胞中的miR-130b表達(dá)，其體內(nèi)外耐藥性和增殖明顯增強(qiáng)；下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130

5、b，其體內(nèi)外耐藥性和增殖明顯下降。
　　(5)特異性上調(diào) MCF-7中 miR-130b，PI3K/Akt信號(hào)通路表達(dá)增加，且上調(diào)PTEN逆轉(zhuǎn)了 miR-130b過(guò)表達(dá)所致的耐藥和增殖能力的增加；特異性下調(diào)MCF-7/ADR中 miR-130b，PI3K/Akt信號(hào)通路表達(dá)減弱，且下調(diào)PTEN逆轉(zhuǎn)了干擾miR-130b所致的耐藥和增殖能力的減弱。
　　結(jié)論：
　　(1) miR-130b和PTEN在人乳腺癌組織及耐藥細(xì)