miR-130b通過PI3K-Akt信號通路靶向調(diào)控PTEN在乳腺癌多藥耐藥中的研究.pdf

1、目的：通過研究miR-130b和PTEN在乳腺癌組織及細胞株中的差異表達，闡明 miR-130b靶向P TEN通過PI3K/Ak t信號通路調(diào)控乳腺癌多藥耐藥性及增殖的功能機制，為乳腺癌治療提供新的策略。
　　方法：
　　(1)通過qRT–PCR檢測miR-130b和PTEN在乳腺癌組織（乳腺癌組織和癌旁正常組織）及細胞株（人乳腺癌細胞株 MCF-7和人乳腺癌耐阿霉素細胞株MCF-7/ADR）中的差異表達。
　　(2)

2、特異性上調(diào)MCF-7細胞中的miR-130b、下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b，采用real-time PCR、Western Blot、免疫熒光技術(shù)檢測過表達、干擾前后MCF-7、MCF-7/ADR細胞中P TEN的表達情況。
　　(3)采用生物信息學技術(shù)及雙熒光素酶報告實驗驗證 miR-130b與PTEN的靶向關(guān)系。
　　(4)采用CCK8、克隆形成、流式細胞技術(shù)、免疫熒光、體內(nèi)成瘤及免疫組化技術(shù)驗證miR-1

3、30b過表達及干擾后，乳腺癌細胞在體內(nèi)、外對藥物敏感性及增殖的變化。
　　(5)特異性上調(diào)MCF-7中miR-130b和PTEN，下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b和PTEN，檢測共轉(zhuǎn)染后MCF-7和MCF-7/ADR細胞中PTEN-PI3K/Akt信號通路的變化及在體外對藥物敏感性和增殖的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) miR-130b在人乳腺癌組織及耐藥細胞株MCF-7/ADR中的表達明顯高于乳腺癌癌旁正常

4、乳腺組織及乳腺癌細胞株 MCF-7中的表達，且 miR-130b和 P TEN表達呈負相關(guān)。
　　(2)特異性上調(diào) MCF-7細胞中 miR-130b，PTEN表達下降；特異性下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130b，P TEN表達增加。
　　(3) PTEN是miR-130b的靶基因。
　　(4)特異性上調(diào)MCF-7細胞中的miR-130b表達，其體內(nèi)外耐藥性和增殖明顯增強；下調(diào)MCF-7/ADR中的miR-130

5、b，其體內(nèi)外耐藥性和增殖明顯下降。
　　(5)特異性上調(diào) MCF-7中 miR-130b，PI3K/Akt信號通路表達增加，且上調(diào)PTEN逆轉(zhuǎn)了 miR-130b過表達所致的耐藥和增殖能力的增加；特異性下調(diào)MCF-7/ADR中 miR-130b，PI3K/Akt信號通路表達減弱，且下調(diào)PTEN逆轉(zhuǎn)了干擾miR-130b所致的耐藥和增殖能力的減弱。
　　結(jié)論：
　　(1) miR-130b和PTEN在人乳腺癌組織及耐藥細