辣椒素通過激動(dòng)TRPV1受體對(duì)帕金森病大鼠模型神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、研究背景和目的
　　黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元變性死亡所導(dǎo)致的體內(nèi)多巴胺(DA)及其代謝產(chǎn)物含量減少是導(dǎo)致帕金森病的主要原因，其減少程度與多巴胺能神經(jīng)元喪失程度成正相關(guān)。絡(luò)氨酸羥化酶(TH)為DA合成限速酶，研究證明PD患者及PD動(dòng)物模型TH含量明顯降低，因此，通過干預(yù)提高TH含量及活性已成為減緩PD進(jìn)展的重要治療策略。
　　瞬時(shí)受體電位香草醛亞型1(TRPV1)是一種非選擇性陽(yáng)離子通道，可被辣椒素選擇性激活。傳統(tǒng)上，TRPV

2、1被認(rèn)為涉及廣泛的疾病領(lǐng)域，包括疼痛（炎癥，內(nèi)臟，癌癥和神經(jīng)?。装Y性腸病，間質(zhì)性膀胱炎，尿失禁，氣道疾病，胰腺炎和偏頭痛，其涉及到的機(jī)制包括炎癥，免疫，凋亡，氧化應(yīng)激等諸多方面。最新研究表明TRPV1不僅在感覺神經(jīng)元高度表達(dá)，而且高表達(dá)于其他功能腦區(qū)，并參與神經(jīng)元損傷的細(xì)胞過程。此外，深入研究發(fā)現(xiàn)TRPV1可降低氧化應(yīng)激以及腦梗死的相關(guān)標(biāo)志物，提高運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能。提示其可能在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。本研究通過使用6-羥基

3、多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型來探討TRPV1的神經(jīng)保護(hù)作用，為其可能作為新的藥物治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　研究方法
　　隨機(jī)選取108只雄性健康Wistar大鼠，體重控制為220g-250g，由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。將其隨機(jī)分為正常對(duì)照組（20只）、假手術(shù)組（右側(cè)腦前內(nèi)側(cè)束立體定向注射生理鹽水，20只），6-OHDA組（右側(cè)腦前內(nèi)側(cè)束立體定向注射6-OHDA，40只），6-OHDA+辣椒素組（即干預(yù)組，

4、注射6-OHDA后每天每只給予辣椒素1mg/kg腹腔注射，連續(xù)注射7d，辣椒素劑量為1mg/kg，40只）。對(duì)大鼠分別進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)（包括旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)與曠場(chǎng)試驗(yàn)）、蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)黑質(zhì)及紋狀體TH及TRPV1表達(dá)水平、免疫組織化學(xué)檢測(cè)黑質(zhì)TH+神經(jīng)元、測(cè)定大鼠腦內(nèi)CAT、SOD、MDA含量。
　　所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均使用GraphPad Prism5.0軟件處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述;采用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間均數(shù)比較，p＜

5、0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　研究結(jié)果
　　1.行為學(xué)結(jié)果示與6-OHDA組相比，干預(yù)組大鼠誘發(fā)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯減少(n=10，p＜0.01)，大鼠1分鐘內(nèi)行走距離明顯增多，平均速度明顯增快，中央格停留時(shí)間顯著減少，且差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=10，p＜0.05)。
　　2.免疫印跡結(jié)果示干預(yù)組大鼠黑質(zhì)及紋狀體TRPV1及TH蛋白表達(dá)水平較其余三組明顯增高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=6，p＜0.01)。
　　3

6、.組化結(jié)果示與6-OHDA組相比，干預(yù)組黑質(zhì)TH+神經(jīng)元數(shù)目明顯增多，此外干預(yù)組大鼠黑質(zhì)致密部TH陽(yáng)性神經(jīng)元樹突明顯增多，軸突長(zhǎng)度增加。
　　4.與6-OHDA組相比，干預(yù)組右腦CAT、SOD水平均明顯增高，MDA水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.977，p=0.0139; t=2.787，p=0.0192; t=2.563，p=0.0282)，左腦6-OHDA組與干預(yù)組相比CAT、SOD、MDA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞